目的 探讨促甲状腺激素(TSH)对软骨细胞(PMCs)分化的作用及相关机制。 方法 利用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光检测PMCs细胞外基质Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col Ⅹ)以及基质金属蛋白酶3和13(MMP3,MMP13)的表达变化。采用qRT-PCR、ELISA检测TSH刺激PMCs后炎症因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)的表达水平。应用高通量RNA-seq技术筛选TSH调控PMCs分化的差异表达基因,通过在原代PMCs中过表达CTRP3,探索TSH调控PMCs分化的机制。 结果 qRT-PCR、Western blotting结果显示,TSH刺激下PMCs中MMP3(P=0.016,P<0.001)和MMP13(P均<0.001)的表达显著增加。qRT-PCR、ELISA结果显示,IL-1β(P=0.007,P=0.002)、IL-6(P均<0.001)、TNFα(P=0.006,P<0.001)的表达上调。通过RNA-seq筛选出差异表达基因CTRP3。CTRP3过表达后PMCs中Col Ⅱ表达增高(F=76.062,F=77.085,F=190.115)、Col Ⅹ表达降低(F=33.494,F=38.424,F=43.351);同时与单纯TSH刺激相比,MMP3(F=88.607,F=214.145,F=135.60)、MMP13(F=116.561,F=138.674,F=86.865)表达均显著降低(P均<0.001),IL-1β、IL-6、TNFα的表达则均降低(P均<0.001)。 结论 CTRP3对TSH诱导的PMCs分化具有保护作用,有望成为亚临床甲状腺功能减退症(SCH)患者关节损伤的潜在治疗靶点。

目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)基因表达对乳腺癌(BC)细胞凋亡的影响及其机制。 方法 采用qRT-PCR检测正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和4种BC细胞系(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3和BT-20)中MAD2L1 mRNA表达水平。将MAD2L1 siRNA转染至MDA-MB-231细胞中,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中MAD2L1 mRNA和蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术法检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK(Thr180/Thr182)和p38MAPK等蛋白表达水平。采用p38MAPK抑制剂SB203580联合处理上述细胞,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率的变化;Western blotting检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK和p38MAPK表达水平的变化。 结果 BC细胞系中MAD2L1 mRNA表达水平高于MCF-10A细胞,其中MDA-MB-231细胞最为显著。干扰MAD2L1基因可降低MDA-MB-231细胞中MAD2L1 mRNA和蛋白表达水平(t_mRNA=10.51,P_mRNA<0.001;t_蛋白=18.30,P_蛋白<0.001),同时抑制细胞增殖(F_组别=243.36、F_时间=44.00、F_{组别×时间}=9.881,P均<0.001),促进细胞凋亡(t=9.10,P<0.001),并上调Bax、cleaved-caspase-3和p-p38MAPK蛋白表达水平(t_Bax=15.05,P_Bax<0.001;t_{cleaved-caspase-3}=5.26,P_{cleaved-caspase-3}=0.006;t_p-p38MAPK=28.46,P_p-p38MAPK<0.001),下调Bcl-2蛋白表达水平(t_Bcl-2=14.23,P<0.001)。然而,SB203580处理可抑制MAD2L1基因干扰对MDA-MB-231细胞凋亡的诱导作用(P=0.002)。 结论 干扰MAD2L1基因表达可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与激活p38MAPK信号通路有关。

目的 设计一种新式骨盆及髋臼通道螺钉的置钉方法,根据该方法设计相应装置并进行人体标本研究,以判断该方法的置钉效果。 方法 本研究以CT影像数据为基础,利用投影原理和方向分解的方法,准确定位钉道入钉点及入钉方向,并根据以上理论设计制作了一套专用定位架。术前将定位架固定到人体骨盆标本上并进行CT扫描以获得数据,利用CT分析软件规划钉道,再通过方向分解的方法测得所需定位参数,术中在定位架上做出相应的调整,即可准确定位钉道。 结果 利用上述方法,成功进行骶髂螺钉、LC II螺钉、顺行前柱螺钉的置入。CT重建结果显示,术后钉道位置与术前规划位置高度一致,术后X线检查显示结果符合临床要求。 结论 本方法可准确定位骨盆及髋臼通道螺钉的空间位置,极大提高了手术的准确性。本方法原理简单,易于学习和操作,且价格低廉,易于在广大基层医院中普及,为骨盆及髋臼的微创治疗提供新的有效手段。

目的 探讨儿童心肌炎潜在的诊断标志物并明确其在人心肌细胞炎症中的生物学功能。 方法 筛选儿童心肌炎基因芯片结果中差异表达的长链非编码RNA(LncRNA),继而扩大样本量进行验证后,确立目标分子。收集心肌炎患儿18例(儿童心肌炎组)及健康查体儿童18例(正常对照组)的基本资料及临床信息,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测目标分子的表达水平,绘制受试者操作曲线(ROC)判断目标分子用于诊断儿童心肌炎的价值。利用脂多糖刺激人心肌细胞(AC16)构建心肌细胞炎症模型,将小干扰RNA转染至AC16中抑制目标分子的表达。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清中炎症因子及心肌损伤标志物的蛋白浓度,采用CCK8法检测细胞的增殖活性。 结果 确定NONHSAT247814.1为本研究的目标分子。NONHSAT247814.1在儿童心肌炎组的相对表达量高于正常对照组(P<0.01),其在急性期的相对表达量高于恢复期。与外周循环中的N端脑钠肽前体呈正相关(R2=0.40, P=0.005),与左心室射血分数呈负相关(R2=-0.53, P=0.000 6); NONHSAT247814.1诊断儿童心肌炎的ROC曲线(AUC=0.89, P<0.001,灵敏度为83.33%,特异度为88.89%);在细胞水平,降低NONHSAT247814.1的表达,可以减少白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肌钙蛋白(cTnT)及B型利钠肽(BNP)的释放,增加细胞的增殖活性。 结论 NONHSAT247814.1具有儿童心肌炎诊断标志物潜力,抑制NONHSAT247814.1的表达,可以减轻LPS诱导的心肌细胞炎症损伤。

目的 筛选健康对照与不同进展期胰腺癌患者的血清外泌体差异蛋白质,绘制差异蛋白质表达图谱,并分析差异蛋白质参与的生物学过程。 方法 采用非标记定量蛋白质组学进行外泌体蛋白质检测,筛选差异蛋白质并进行生物信息学分析;利用蛋白免疫印迹对与胰腺癌进展相关的蛋白质进行血清学验证。 结果 在对照组、胰腺癌未转移组和转移组样品中共检测到2 242个蛋白质。通过不同分组差异蛋白质分析,共鉴定出664个差异具有统计学意义的蛋白质,主要参与囊泡介导转运、局灶黏附、细胞外基质(ECM)受体相互作用等信号通路。此外,鉴定到在3组间差异均有统计学意义的蛋白质5个,验证发现富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)在胰腺癌转移组外泌体中表达量较高。 结论 对照组、胰腺癌未转移组和转移组间蛋白质表达存在差异,差异蛋白质主要富集于局灶黏附、细胞外基质受体相互作用等信号通路,且在3组间表达均有差异的外泌体蛋白质LRG1可能成为监测胰腺癌进展的血清学标志物。

目的 探讨接受Stupp方案治疗的老年胶质母细胞瘤(GBM)患者预后的影响因素。 方法 分析2014年1月至2018年1月接受Stupp方案治疗的老年GBM患者病例资料,包括一般人口学、临床病例、Karnofsky功能状态(KPS)评分和分子标志物O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)、异柠檬酸脱氢酶-1(IDH-1)、Ki67与TP53的表达等。通过Kaplan-Meier对总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)进行单因素分析,Cox回归模型进行多因素比较。 结果 共纳入91例样本,49例(53.8%)Ki67≥30%,IDH野生型78例(85.7%),MGMT甲基化35例(38.5%),TP53蛋白阳性44例(48.4%);老年GBM患者1、3、5年OS分别为41.8%、12.8%、9.6%,1、3年PFS分别为16.5%、7.6%;KPS评分(HR=0.445,95%CI:0.265~0.745,P=0.002)、认知功能(HR=2.675,95%CI:1.051~6.089,P=0.039)、MGMT(HR=0.384,95%CI:0.218~0.675, P=0.001)、ki67(HR=1.855,95%CI:1.157~2.975,P=0.010)与老年GBM患者OS有统计学意义的关联性,KPS评分(HR=0.598,95%CI:0.358~0.998,P=0.049)、MGMT(HR=0.335,95%CI:0.187~0.601,P<0.001)、IDH-1(HR=0.437,95%CI:0.200~0.958,P=0.039)、Ki67(HR=1.958,95%CI:1.203~3.187,P=0.007)与GBM患者PFS有统计学意义的关联性。 结论 老年GBM患者预后差,KPS评分、认知功能、MGMT、IDH-1和Ki67可预测其预后。

目的 利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术研究济南地区6月龄内健康婴儿鼻咽部微生态菌群分布特征,为鼻咽部微生态研究提供样本库信息。 方法 采集2019年11月至2020年4月济南地区312例6月龄内健康婴儿鼻咽拭子,增菌后,分离培养获得纯菌株;利用MALDI-TOF MS技术鉴定分离株到种置信水平;312例婴儿分为月龄≤2组、3月龄组、4月龄组和5月龄组,组间比较采用SPSS 22.0统计学软件,卡方或Fisher确切概率法统计分析。 结果 312例健康婴儿鼻咽拭子获得纯菌株741株,分属于25个属74种细菌。优势菌属为葡萄球菌属(31.6%)、棒杆菌属(30.8%)、链球菌属(18.9%)、莫拉菌属(8.6%)和狡诈球菌属(2.0%)。同时发现一些不常见菌种,例如缺陷乏氧菌、放射根瘤菌等。金黄色葡萄球菌检出率男婴(40.5%)高于女婴(26.4%),接近棒杆菌女婴(42.4%)高于男婴(27.4%)。4个年龄组中,假白喉棒杆菌检出率依次升高(10.8%、17.7%、18.9%、46.7%);肺炎链球菌检出率依次升高(2.2%、2.3%、4.1%、20.0%)。 结论 济南地区健康6月龄内婴儿鼻咽部微生态菌群以优势菌为主呈现多样化,MALDI-TOF MS是鉴定常见和不常见微生物菌种的快速、高通量技术手段。本研究可为济南地区儿童鼻咽部微生态研究提供有价值的样本库资料。

目的 探讨超声引导下细针穿刺细胞学检查(FNAB)和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)^V600E(BRAF^V600E)分子检测在甲状腺癌诊断中的价值。 方法 回顾性分析2019年1月至2021年12月304例甲状腺结节的患者,并行FNAB细胞病理和BRAF^V600E分子检测。以术后病理诊断为金标准,分为FNAB组(n=138)和FNAB联合BRAF^V600E组(n=166),采用受试者工作特征曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)评估两组的诊断效能,同时分析细胞病理分类Bethseda Ⅰ、Ⅲ~Ⅴ类结节的超声特点。 结果 304例患者中诊断为甲状腺癌的患者为278例,其中277例甲状腺乳头状癌,1例甲状腺髓样癌,诊断为良性病变的26例。两组中Bethseda Ⅰ、Ⅲ~Ⅴ类的结节有53个,超声特点以钙化(28.3%)和结节大小<1 cm(45.3%)为主。依据术后病理结果,FNAB细胞病理诊断组的效能评估:敏感性为93.9%,特异性为57.1%,AUC为0.824。FNAB细胞病理联合BRAF^V600E组的效能评估:敏感性为98.0%,特异性为84.2%, AUC为0.911,且AUC联合分析>AUC_FNAB。 结论 FNAB细胞病理联合BRAF^V600E基因检测对甲状腺癌的诊断效能优于单独应用FNAB。

目的 评估与腹主动脉瘤(AAA)进展相关的基线CT特征,为AAA的临床治疗路径提供参考。 方法 选取2012年1月至2021年12月至少行两次增强CT扫描的83例AAA患者的临床及影像资料进行分析,两次扫描间隔3个月以上。测量瘤体的直径、面积、长度、曲度、血栓面积等基线CT特征,并根据瘤体直径计算AAA的年进展速度。将有进展的AAA分为缓慢进展组(进展速度≤0.25 cm/y)和快速进展组(进展速度>0.25 cm/y)。采用独立样本t检验或Mann-Whitney U非参数检验进行组间比较;运用单变量与多变量线性回归分析,确定与AAA 进展有关的基线CT特征。 结果 71例患者存在病变进展,其中缓慢进展组35例,快速进展组36例。快速进展组的基线瘤体长度显著大于缓慢进展组(P=0.03)。多因素相关性分析结果显示,瘤体面积(β=0.048, P=0.020)、长度(β=0.051, P=0.007)与进展速度呈独立正相关,瘤体曲度(β=-0.005, P=0.034)、血栓面积(β=-0.034, P=0.013)与进展速度呈独立负相关。 结论 AAA患者基线CT特征中瘤体面积、长度、曲度、血栓面积与病变进展显著相关。

目的 探讨单核苷酸多态性微阵列分析技术在早中孕期自然流产中的应用。 方法 选取364例自然流产组织为研究对象,应用单核苷酸多态性微阵列分析技术回顾分析导致自然流产的染色体异常分布。分别按孕周、年龄、流产组织性别分组:孕6~12周组(n=300),孕13~28周组(n=64);孕妇年龄<35岁组(n=292),≥35岁组(n=72);男性组(n=147),女性组(n=217)。比较各组各类染色体异常发生率。 结果 在364例自然流产组织中,检出染色体异常 191例(52.47%)分别为:染色体数目异常177例;致病性染色体微重复微缺失11例;全染色体单亲二倍体3例,病理均为葡萄胎,来自父亲。孕6~12周组染色体数目异常发生率(55.33%)、三体发生率(37.00%)、单体发生率(8.33%)、三倍体发生率(6.00%)与孕6~12周组染色体数目异常发生率(17.19%)、三体发生率(9.38%)、单体发生率(3.13%)、三倍体发生率(0%)比较差异均有统计学意义(P<0.001;P<0.001;P=0.030;P=0.004)。孕13~28周仅检出18三体、21三体、45,XO及嵌合体共13例,占染色体数目异常7.34%(13/177)。孕妇年龄≥35岁组染色体数目异常发生率(63.88%)、三体发生率(51.39%)与<35岁组染色体数目异常发生率(44.86%)、三体发生率(27.40%)比较差异有统计学意义(P=0.048;P=0.005)。男性组与女性组染色体差异率比较差异无统计学意义(P=0.562)。 结论 孕早期、高龄孕妇自然流产组织染色体数目异常率更高;染色体异常是自然流产的主要原因;应用单核苷酸多态性微阵列分析技术能够检出其他方法无法检出的单亲二倍体。

目的 对3例怀疑M蛋白相关性杆状体肌病患者进行肌肉病理检查、M蛋白筛查明确诊断,提高对这一罕见疾病的认识并探讨对此疾病的诊疗方案。 方法 报道3例M蛋白相关性杆状体肌病,结合文献复习对病例特点进行总结。 结果 3例患者均表现为进行性加重的肌肉无力症状,完善肌肉活检诊断为杆状体肌病,合并M蛋白,给予行自体造血干细胞移植治疗有效。 结论 散发的晚发型成人杆状体肌病是一种罕见的、亚急性进展的肌病,常合并M蛋白,针对清除M蛋白的治疗是有效的。

目的 对1例左房黏液瘤致脑梗死及脑转移患者的临床表现、影像学特征、治疗方法进行分析,以提高临床医生对该疾病的诊疗能力。 方法 回顾1例诊断为左房黏液瘤脑转移患者的临床资料并进行分析,结合相关文献对该疾病进行总结。 结果 患者为69岁、男性,入院前6个月因急性脑梗死检查发现左心房占位,术后病理显示左房黏液瘤;入院前3个月检查发现颅内多发占位;入院完善相关检查,行手术治疗,术后病理显示:心房黏液瘤转移。 结论 心房黏液瘤可引起多发急性脑梗死及脑转移,对于多发急性脑梗死患者有必要进行心脏超声检查,脑转移通常在诊断为心脏黏液瘤的同时或几个月后发现,因此,心房黏液瘤患者需要长期随访。

目的 引进中文版孕期身体感受量表(BUMPs),并对其进行信效度检验。 方法 遵循Brislin翻译-回译模式对英文版BUMPs进行翻译、回译及文化调适,形成中文版BUMPs。于2020年5月至2021年4月,采用方便抽样法,对946名妊娠期女性进行调查,评价量表信效度。 结果 中文版BUMPs包括对体型的不满意、对超重的担忧和身体负荷3个维度,共14个条目。探索性因子分析结果显示,3个公因子的累计方差贡献率为58.89%。验证性因子分析支持3因子理论构念。总量表的Cronbachs α系数为0.841, 重测信度为0.605。 结论 中文版 BUMPs具有良好的信效度,可用于评估我国妊娠期女性对其身体意象的感受。

目的 应用贝叶斯累加回归树(BART)模型对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的仅手术与手术+化疗两种治疗方案的疗效进行个性化评价,并识别高受益患者亚组。 方法 提取美国SEER数据库中2012—2013年间所有NSCLC患者资料,以总生存时间不小于5年作为结局,按照治疗方案分类进行比较。运用倾向性评分匹配法使比较组间协变量均衡,应用BART模型计算个体处理效应(ITE),运用决策树模型进行亚组分析。 结果 本研究BART所对应的模型曲线下面积(AUC)大于0.8,结果可信度较高,99.5%患者采用手术+化疗方案获得不同程度更优疗效,得到AJCC分期、原发灶位置、转移程度等临床实践中重要的亚组分类特征,并得出疗效最优的亚组。所得亚组中,相较于仅手术的治疗方案,远处转移、原发灶位于肺中叶的女性患者更能于手术+化疗方案中受益。 结论 构建的BART模型可以较好地评价NSCLC患者两种治疗方案的个性化疗效,为今后同类疾病的个性化医疗实践提供依据。

目的 通过TCGA和GEO数据库筛选与宫颈癌相关的关键基因,探讨其分子机制及临床意义。 方法 通过TCGA和GEO数据库获取宫颈癌的基因表达谱数据,采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)获取宫颈癌与正常宫颈组织差异表达基因(DEGs),对DEGs进行富集分析、蛋白-蛋白互作网络(PPI)分析并识别关键基因,进一步对关键基因与预后及蛋白表达、以及与宫颈癌免疫浸润的关系进行分析。 结果 通过TCGA与GEO数据库中共得到88个宫颈癌DEGs,GO分析发现大部分基因与核染色体减速分裂、核染色体分裂、染色体集缩、核染色体等相关;KEGG信号通路分析发现宫颈癌DEGs参与了细胞周期、DNA复制、卵母细胞减数分裂、p53信号通路、同源重组等信号通路。鉴定出20个宫颈癌关键基因,仅有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)低表达患者的总生存期(OS)长于MAD2L1高表达患者(P=0.013),但MAD2L1高表达患者的无病生存期(DFS)与低表达患者差异无统计学意义(P>0.05),宫颈癌组织中MAD2L1蛋白高于正常组织。TIMER在线软件分析显示,MAD2L1与肿瘤的免疫浸润水平均相关(P<0.05)。 结论 发现了与宫颈癌相关的候选基因MAD2L1,其与宫颈癌患者的预后及免疫浸润均有关,可能成为宫颈癌预后预测及治疗的新靶点。