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自噬在APAP肝损伤及肝再生过程中的调控作用
- 董萍,沈海涛,乔亚琴,路燕
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2026, 64(5):
42-49.
doi:10.6040/j.issn.1671-7554.0.2025.0545
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多维度评价
目的 探究自噬在对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)诱导的小鼠正常肝细胞(AML-12)肝损伤和肝再生中的作用以及其可能机制。 方法 体外培养AML-12细胞,采用Western blotting法检测APAP作用于该细胞0、1、4、12、24、48、72h微管相关蛋白 1A/1B 轻链 3-II(microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3-II, LC3II)蛋白表达,筛选出APAP作用后出现明显肝损伤和肝再生的时间点。一方面使用自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin, RAPA)作用于肝损伤点,分为对照组、RAPA组、APAP 4 h组和APAP 4 h + RAPA 组,采用Western blotting法检测各组细胞LC3II、自噬相关蛋白 5(autophagy related 5, ATG5)、螯合体1(sequestosome 1, p62)、受体相互作用蛋白激酶 1(receptor-interacting protein kinase 1, RIP1)、受体相互作用蛋白激酶 3(receptor-interacting protein kinase 3, RIP3)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4, GPX4)、溶质载体家族 7 成员 11(solute carrier family 7 member 11, SLC7A11)、p53蛋白水平; 采用RT-qPCR法检测各组细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、铁蛋白重链 1(ferritin heavy chain 1, FTH1)、核受体辅激活因子 4(nuclear receptor coactivator 4, NCOA4)mRNA水平;采用亚铁离子试剂盒检测Fe2+水平。另一方面使用自噬抑制剂氯喹(chloroquine, CQ)作用于肝再生点,分为对照组、CQ组、APAP 24 h组和APAP 24 h + CQ组,采用Western blotting法检测各组细胞LC3II、ATG5、p62、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、细胞周期蛋白 D1(Cyclin D1)蛋白水平;采用RT-qPCR法检测各组细胞Ki-67、yes 相关蛋白 1(yes-associated protein 1, YAP1)、无翅型MMTV整合位点家族成员 2(wingless- type MMTV integration site family member 2, Wnt2)mRNA水平。 结果 损伤方面,与对照组相比,APAP 4 h组RIP1、RIP3、p53蛋白水平和TNF-α、IL-6、NCOA4 mRNA、Fe2+水平上调(P<0.05),LC3II、SLC7A11、GPX4蛋白水平和FTH1 mRNA水平下调(P<0.05);与APAP 4 h组相比,APAP 4 h + RAPA组LC3II、ATG5、SLC7A11、GPX4蛋白水平和FTH1 mRNA水平上调(P<0.05),p62、RIP1、RIP3、p53蛋白水平和TNF-α、IL-6、NCOA4 mRNA、Fe2+水平下调(P<0.05)。再生方面,与对照组相比,APAP 24 h组LC3II蛋白水平和Ki-67、Wnt2、YAP1 mRNA水平上调(P<0.05),p62、PCNA蛋白水平下调(P<0.05);与APAP 24 h组相比,APAP 24 h + CQ组LC3II、p62蛋白水平上调(P<0.05),ATG5、PCNA、Cyclin D1蛋白水平和Ki-67、Wnt2、YAP1 mRNA水平下调(P<0.05)。 结论 激活自噬可降低炎症反应、程序性坏死和铁死亡,最终减轻APAP肝损伤;而抑制自噬可能减轻APAP肝损伤后的肝再生过程。自噬激动剂有望成为治疗APAP肝损伤的新靶点。