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白藜芦醇衍生物TMS对脂多糖诱导血管内皮细胞表达NO、ICAM-1和NF-κB的影响
- 付海燕, 胡占升, 杜红阳
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2015, 53(11):
10-15.
doi:10.6040/j.issn.1671-7554.0.2015.255
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目的 探讨白藜芦醇衍生物反式-3,5,4'-三甲氧基二苯乙烯(TMS)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEs)表达NO、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和核转录因子-κB(NF-κB)的影响.方法 采用CCK-8检测不同浓度TMS对HUVEs存活率的影响.细胞分为正常对照组(CON组)、LPS组、低浓度TMS+LPS组、中浓度TMS+LPS组、高浓度TMS+LPS组和吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)+LPS组,不同浓度TMS和10 μmol/L PDTC预处理细胞,0.1 μg/mL的LPS进行诱导后,Griess法检测各组细胞产生的NO浓度;Real-time PCR检测ICAM-1、NF-κB p65的mRNA表达;Western blotting检测ICAM-1、NF-κB p65和IκBα的蛋白表达;免疫细胞化学染色检测ICAM-1及NF-κB p65的蛋白表达.结果 较低浓度(5、10 μmol/L)TMS对细胞的存活率影响较小,而较高浓度(50、100 μmol/L)TMS处理后,细胞存活率明显下降,并呈时间、剂量依赖性.Griess法结果显示低、中、高浓度TMS+LPS组与PDTC+LPS组的NO表达量均较LPS组降低(P<0.05).Real-time PCR和Western blotting检测结果均显示,与LPS组、CON组相比,中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中ICAM-1、NF-κB p65 的mRNA和蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01).Western blotting结果还显示,除CON组外,NF-κB p65蛋白在LPS组、中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中均有核表达;IκBα蛋白在LPS组中表达量较CON组降低(P<0.01),其在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组的表达低于CON组(P均<0.05).细胞免疫荧光检测结果显示,ICAM-1蛋白在LPS组中表达强荧光,在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中表达均减弱;NF-κB p65蛋白在CON组中无表达,在LPS组中为细胞核荧光强表达,在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中荧光表达相对减弱,且无核表达.结论 白藜芦醇衍生物TMS抑制LPS诱导血管内皮细胞的NO、ICAM-1和NF-κB p65表达,且其对ICAM-1的抑制可能是通过NF-κB细胞信号通路起作用.