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山东大学学报(医学版) ›› 2011, Vol. 49 ›› Issue (4): 57-.

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siRNA靶向抑制CPB2基因对乳腺癌细胞TAFI表达及生长和转移的影响

王泽筠1,徐成伟1,马晓丽2,郑燕2,郏雁飞2,肖东杰2,汪运山2   

  1. 山东大学 1.第二医院检验科, 济南 250033; 2.附属济南市中心医院中心实验室, 济南 250013
  • 收稿日期:2010-11-30 出版日期:2011-04-10 发布日期:2011-04-10
  • 通讯作者: 徐成伟(1964- ),男,教授,主要从事血栓与止血的研究。 E-mail:xuchengwei-jyk@163.com
  • 作者简介:王泽筠(1984- ),女,硕士研究生,主要从事血栓与止血的研究。
  • 基金资助:

    山东省自然科学基金资助项目(ZR2009CM083)。

Effect of CPB2 gene silencing on TAFI expression and   metastasis in breast cancer cells

WANG Ze-jun1, XU Cheng-wei1, MA Xiao-li2, ZHENG Yan2, JIA Yan-fei2, XIAO Dong-jie2, WANG Yun-shan2   

  1. 1. Clinical Laboratory, The Second Hospital of Shandong University, Jinan 250033, China;
    2. Central Laboratory, Jinan Central Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250013, China
  • Received:2010-11-30 Online:2011-04-10 Published:2011-04-10

摘要:

目的      探讨靶向羧肽酶B2(CPB2)基因的小干扰RNA(siRNA)对乳腺癌MDA-MB-231细胞凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)表达以及对乳腺癌细胞的生长和转移的影响。方法     将细胞分为siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组、阴性对照组和空白对照组5组,设计并化学合成编码TAFI基因(CPB2)的特异性siRNA,用脂质体2000转染至MDAMB-231细胞中,采用Western blot、RT-PCR分别检测各组TAFI蛋白及mRNA的表达,Transwell侵袭实验检测癌细胞转移侵袭能力,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活和生长情况。结果    siRNA抑制CPB2表达后,TAFI 蛋白及其mRNA表达水平显著下降,siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组与阴性对照组比较细胞侵袭力和细胞生长都明显受到抑制(P<0.05)。结论    靶向CPB2的siRNA可有效下调乳腺癌细胞MDA-MB-231中TAFI蛋白及其mRNA表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭力,抑制细胞的生长和转移。

关键词: 乳腺肿瘤;RNA干扰;凝血酶激活的纤溶抑制物

Abstract:

Objective     To investigate effects of carboxypeptidase B2 (CPB2) gene silencing on expression of thrombin activated fibrinolysis inhibitor(TAFI) and growth and metastasis of the breast cancer cell line MDA-MB-231.  Methods    Cells were divided into five groups: the siRNA-1 group, the siRNA-2 group, the siRNA-3 group, the negative control group and the blank control group. Based on the sequence of CPB2, three siRNAs were designed and chemically synthesized, and then transfected into the breast cancer cell line MDA-MB-231 with lipofectamine 2000.  TAFI mRNA and protein levels were determined by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot.  Cell invasive and metastasis abilities and growth inhibition were determined by Transwell assay and MTT assay.  ResultssiRNAs targeting CPB2 significantly down -regulated mRNA and protein levels of TAFI (P<0.05), and the inhibition ratio ranged from 55.4% to 42.6%.  The growth of the breast cancer cell line MDA-MB-231 was inhibited in siRNA groups (P<0.05), and invasive and metastasis abilities were also significantly inhibited compared with the negative control group (P<0.05).  Conclusion    CPB2-siRNA can significantly down-regulate expression of TAFI in transcriptional and translational levels, and inhibits cell growth, invasion and metastasis ability of the breast cancer cell line MDA-MB-231.

Key words: Breast tumor; RNA interference; Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor

中图分类号: 

  • R737.9
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