RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

山东大学学报(医学版) ›› 2011, Vol. 49 ›› Issue (4): 52-56.

RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

阚艳艳1，张敬敬1，王哲1，田永杰1，戚晓霞2，张捷3

1.山东大学附属省立医院妇产科, 济南 250021； 2.新汶矿业集团中心医院妇产科，山东泰安 271233；
3.山东大学附属省立医院中心实验室，济南 250021

收稿日期:2010-12-17 出版日期:2011-04-10 发布日期:2011-04-10
通讯作者: 田永杰(1964- ) ，男，主任医师，教授，主要从事妇科肿瘤和普通妇科的研究。 E-mail:tianyongjie@sdu.edu.cn
作者简介:阚艳艳(1983- ) ，女，硕士研究生，主要从事卵巢癌化疗耐药性的研究。
基金资助:
山东省自然科学基金资助项目(ZR2009CM104)；山东省医药卫生科技发展计划项目(2009HZ065)。

Effect of reduced expression of PARP-1 by RNA interference on cisplatin-resistance and proliferation in the ovarian cancer cell line

KAN Yan-yan1, ZHANG Jing-jing1, WANG Zhe1, TIAN Yong-jie1, QI Xiao-xia2, ZHANG Jie3

1. Department of Obstetrics and Gynecology, Provincial Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250021, China;
2. Department of Obstetrics and Gynecology, Xinwen Mining Group Central Hospital, Tai′an 271233， Shandong, China;
3. Central Laboratory, Provincial Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250021, China

Received:2010-12-17 Online:2011-04-10 Published:2011-04-10

摘要/Abstract

摘要：

目的研究PARP-1基因在卵巢癌化疗耐药发生机制中的作用，探讨以该基因为靶向的小干扰RNA (siRNA)能否有效逆转C13*细胞对顺铂(CDDP)的耐药性。方法采用实时荧光定量PCR (RFQ-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测C13*、OV2008细胞中PARP-1 mRNA和蛋白表达差异；转染PARP1-siRNA后，通过RFQ-PCR和Western法验证干扰效果；应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察转染后细胞对CDDP敏感性变化及对细胞增殖活性的影响。结果 C13*细胞中PARP-1 mRNA和蛋白的表达量分别是OV2008细胞表达量的(2.12±0.97)和(1.89±0.23)倍；特异性PARP1siRNA能有效降低C13*细胞中PARP-1 mRNA、蛋白水平及其对顺铂的半数抑制浓度(IC50)，分别下降(71.23±5.41)%、(73.84±3.78)% 和(89.77±10.06)% (P<0.05)，且C13*细胞的生长活力明显下降(P<0.05)。结论 PARP-1蛋白在卵巢上皮性癌细胞中的表达与顺铂敏感性相关；靶向PARP-1基因的siRNA可在转录和翻译水平抑制PARP-1基因表达，并能有效逆转C13*细胞对CDDP的耐药性。

关键词: 卵巢肿瘤；小分子干扰RNA；耐药性，肿瘤；基因，PARP-1

Abstract:

Objective To investigate the role of the PARP-1 gene in the mechanism of chemoresistance in ovarian cancer, and to study the reverse effect of silencing PARP-1 by RNA interference on cisplatin(CDDP)-resistance of C13* cells. Methods Expressions of PARP-1 mRNA and protein in C13* and OV2008 cells were detected by real-time fluorogenic quantitative PCR (RFQ-PCR) and Western blot, respectively. RFQ-PCR and Western blot were also used to validate whether the PARP-1 gene was silenced. The influence of siRNA on cellular sensitivity to CDDP and cell proliferation activity was detected by MTT assay. Results The PARP-1 mRNA and protein levels in C13* cells were (2.12±0.97) and (1.89±0.23) fold of those in OV2008 cells (P<0.05). PARP1siRNA significantly down-regulated PARP-1 mRNA and protein levels (P<0.05). mRNA and protein expressions of PARP-1 were decreased by (71.23±5.41)% and (73.84±3.78)%, respectively(P<0.05). The inhibitory concentration 50%(IC50) of CDDP was decreased by (89.77±10.06)% (P<0.05), and proliferation activity of C13* cells was inhibited (P<0.05). Conclusion Expression of the PARP-1 protein in ovarian cancer cell lines is related to cellular sensitivity to CDDP. PARP1siRNA treatment can significantly down-regulate PARP-1 expression in transcriptional and translational levels, and effectively reverses resistance of C13* cells to CDDP.

Key words: Ovarian neoplasms; Small interfering RNA; Drug resistance， neoplasms; Genes, PARP-1

中图分类号:

R737.31

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