弓形虫重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18的构建及鉴定

山东大学学报(医学版) ›› 2012, Vol. 50 ›› Issue (10): 56-.

弓形虫重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18的构建及鉴定

石娜，何深一，陈琳，周怀瑜，丛华，白杨，赵广会，赵群力

山东大学医学院寄生虫学教研室, 济南 250012

收稿日期:2012-03-02 出版日期:2012-10-10 发布日期:2012-10-10
通讯作者: 何深一（1961- ），男，教授，博士生导师，主要从事弓形虫的研究。E-mail: shenyihe@sdu.edu.cn
作者简介:石娜（1986- ），女，硕士研究生，主要从事弓形虫的研究
基金资助:
国家自然科学基金 (81071373)；山东省自然科学基金 (ZR2009CM079)；家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金(SKLVEB2011KFKT005) ；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2009SW008)

Construction and identification of the recombinant plasmid
pBudCE4.1-AMA1-ROP18 from Toxoplasma gondii

SHI Na, HE Shen-yi, CHEN Lin, ZHOU Huai-yu, CONG Hua,
BAI Yang, ZHAO Guang-hui, ZHAO Qun-li

Department of Parasitology, School of Medicine, Shandong University，Jinan 250012, China

Received:2012-03-02 Online:2012-10-10 Published:2012-10-10

摘要/Abstract

摘要：

目的构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18 DNA重组质粒，并对其进行克隆及鉴定。方法采用PCR法对目的基因进行扩增，构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18重组质粒，转染至人包皮成纤维细胞（HFF）进行表达并用SDS-PAGE和β-actin进行鉴定。结果经测序、双酶切和PCR鉴定，重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18构建正确；经RT-PCR和SDS-PAGE鉴定， AMA1、ROP18基因均在哺乳动物细胞中正确转录与表达。结论成功构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18重组质粒，并可在HFF细胞中稳定表达。

关键词: 弓形虫属；质粒；细胞转染；弓形虫顶端膜抗原1；棒状体蛋白18

Abstract:

Objective To construct, clone and identify the DNA recombinant plasmid pBudCE4.1-AMA1-ROP18. Methods Amplify the target genes by PCR, construct the eukaryotic recombinant plasmid pBudCE4.1-AMA1-ROP18 and express it in human foreskin fibroblast (HFF) cells by transfection. Then identify the plasmid with SDS-PAGE and betaactin. Results We proved that the recombinant plasmid pBudCE4.1-AMA1-ROP18 was constructed correctly by identification of sequencing, double enzyme digestion and PCR.We proved that AMA1 gene and ROP18 gene both transcribed and expressed correctly in mammalian cells by identification of RT-PCR and SDS-PAGE. Conclusion The recombinant plasmid pBudCE4.1-AMA1-ROP18 is constructed successfully and expressed in HFF cells stably.

Key words: Toxocara; Plasmids；Cell transfection；Apical membrane antigen 1; Rhoptry protein 18

中图分类号:

R382.5

石娜，何深一，陈琳，周怀瑜，丛华，白杨，赵广会，赵群力 . 弓形虫重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18的构建及鉴定[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(10): 56-.

SHI Na, HE Shen-yi, CHEN Lin, ZHOU Huai-yu, CONG Hua, BAI Yang, ZHAO Guang-hui, ZHAO Qun-li. Construction and identification of the recombinant plasmid
pBudCE4.1-AMA1-ROP18 from Toxoplasma gondii[J]. JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY (HEALTH SCIENCES), 2012, 50(10): 56-.

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[1]	陈琳，何深一，石娜，周怀瑜，丛华，白杨，赵广会，赵群力. 弓形虫ROP18MIC2重组真核质粒的构建与表达[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(8): 62-.
[2]	赵群力，闵娟，周怀瑜，古钦民，丛华，李瑛. 新型基因佐剂SPreS2真核表达载体的构建及其瞬时表达[J]. 山东大学学报(医学版), 2010, 48(9): 29-.