山东大学学报(医学版) ›› 2014, Vol. 52 ›› Issue (1): 5-9.doi: 10.6040/j.issn.1671-7554.0.2013.574
孙越,刘香岚,王群,郭春,石永玉,张利宁
SUN-Yue, LIU Xiang-lan, WANG-Qun, GUO-Chun, SHI Yong-yu, ZHANG Li-ning
摘要:
目的 制备人肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样蛋白3(TIPE3)的特异性抗体,分析将其用于Western blotting和免疫组化检测TIPE3蛋白表达的可行性和特异性。方法 利用人TIPE3抗原制备兔抗人TIPE3多克隆抗体;构建人TIPE3真核表达载体;采用Western blotting方法检测抗体的特异性、TIPE3在肿瘤细胞系中的表达并用免疫组化方法检测人TIPE3蛋白在组织中的表达。结果 制备的兔抗人TIPE3多克隆抗体的滴度为1∶400,该抗体可特异性地检测细胞中的TIPE3蛋白,与TIPE2无交叉反应;发现人肺腺癌细胞系H1975、肝癌细胞系HepG2高表达TIPE3,但其在宫颈癌细胞系Hela低表达;用于免疫组织化学检测,可检测到TIPE3在肺癌组织中高表达于细胞浆和细胞膜,在癌旁组织和正常肺组织未见表达。结论 成功制备了人TIPE3多克隆抗体,特异性高,可用于TIPE3的Western blotting和免疫组化检测。
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