EC1基因真核表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖的影响

山东大学学报(医学版) ›› 2012, Vol. 50 ›› Issue (6): 75-.

EC1基因真核表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖的影响

戴新1,郑燕2，郏雁飞2，肖东杰2，童书青1，汪运山2

山东大学 1.医学院，济南 250012； 2.附属济南市中心医院中心实验室，济南 250013

收稿日期:2011-12-26 出版日期:2012-06-10 发布日期:2012-06-10
通讯作者: 汪运山(1962- )，男，教授，主要从事肿瘤靶向治疗的研究。E-mail:sdjnwys@163.com
作者简介:戴新(1985- )，女，硕士研究生，主要从事肿瘤靶向治疗的研究
基金资助:
国家自然科学基金(81000869)；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2011YY039)；济南“泉城学者”建设工程招标课题(Q2-06)

Effects of DEC1 on proliferation of gastric cancer cells: an approach
through a eukaryotic over-expression vector

DAI Xin1, ZHENG Yan2, JIA Yan-fei2, XIAO Dong-jie2, TONG Shu-qing1, WANG Yun-shan2

1. School of Medicine, Shandong University, Jinan 250012, China;
2. Central Laboratory, Jinan Central Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250013, China

Received:2011-12-26 Online:2012-06-10 Published:2012-06-10

摘要/Abstract

摘要：

目的构建人分化型胚胎软骨发育基因DEC1真核表达载体，探讨DEC1基因对胃癌细胞增殖的影响。方法提取人胃癌细胞MGC803总RNA，RT-PCR扩增获得DEC1基因，将DEC1基因插入pGEM-T载体，再插入真核表达质粒pcDNA3，将成功构建的pcDNA3-DEC1载体介导转染MGC-803细胞。通过RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞DEC1在mRNA和蛋白水平的表达；MTT法、免疫细胞化学法检测过表达DEC1基因后MGC-803细胞增殖的变化。结果转染pcDNA3-DEC1质粒的MGC-803细胞DEC1 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05); MTT试验、ki-67免疫细胞化学染色显示转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05)。结论 DEC1的过表达能明显增强胃癌细胞MGC-803的增殖能力。

关键词: 胃肿瘤；质粒构建；逆转录聚合酶链反应；转染；细胞增殖

Abstract:

Objective To construct a DEC1 eukaryotic expression vector and to observe the effects of the DEC1 gene on proliferation of MGC-803 cells (a gastric cancer cell line). Method The DEC1 gene was amplified by RT-PCR and cloned into pGEM-T, and then into the eukaryotic expression vector pcDNA3 resulting in a recombinant vector,named pcDNA3-DEC1.pcDNA3-DEC1 was transfected into MGC-803 cells. Expression of DEC1 was detected by RT-PCR and Western blot. The effect of DEC1 on cell proliferation was measured by MTT assay and immunocytochemistry. Results After transfection of MGC-803 cells,their DEC1 expression at both the transcript and protein levels was significantly increased, corresponding to high rates of cell proliferation. Conclusion Expression of the DEC1 gene can promote cell proliferation of gastric cancer cells.

Key words: Gastric neoplasm ; Plasmid construction; Reverse transcription polymerase chain reaction; Transfection; Cell proliferation

中图分类号:

R735.2

戴新1,郑燕2，郏雁飞2，肖东杰2，童书青1，汪运山2. EC1基因真核表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖的影响[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(6): 75-.

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