山东大学学报(医学版) ›› 2009, Vol. 47 ›› Issue (9): 76-80.
王灿1,王潍博1,牟成志2,申蓉1,李文欢1
WANG Can1, WANG Weibo2, MU Chengzhi3, SHEN Rong2, LI Wenhuan2
摘要:
目的构建并筛选能高效沉默大鼠垂体瘤转化基因(rPTTG)的shRNA慢病毒重组载体。方法设计并合成4组特异性针对大鼠PTTG基因的shRNA序列将其构建到慢病毒载体pGCLGFP中;评估慢病毒重组载体在大鼠肾细胞中的转染效率并运用real time PCR技术检测各组重组载体对目的基因的沉默效果。结果PCR及测序结果显示,目的片段插入正确,重组载体构建成功,慢病毒重组载体转染效率达70%以上;4组shRNA序列均有基因敲减效果,并且第4组shRNA(4# shRNA)序列效果最为明显(>80%)。结论成功构建了高效沉默rPTTG基因的慢病毒载体;验证了慢病毒载体作为RNAi载体工具转染效率的可靠性;实验显示4# shRNA能高效抑制内源性rPTTG基因表达。
中图分类号:
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