山东大学学报(医学版) ›› 2009, Vol. 47 ›› Issue (9): 81-85.
刘青春1,李伟1,张伟1,王来城2,张捷2,杨东1,吴帅1
LIU Qingchun1, LI Wei1, ZHANG Wei1, WANG Laicheng2, ZHANG Jie2, YANG Dong1, WU Shuai1
摘要:
目的引入内部核糖体进入位点(IRES),构建HSV1tk与hIL1Ra双基因共表达AAV重组载体并检测其在滑膜细胞中的表达。方法PCR扩增HSV1tk、IRES及hIL1Ra基因片段,分别与pMD18T simple载体连接,测序后,hIL1Ra与HSV1tk先后插入pMDIRES,构建重组质粒pMDHSV1tkIREShIL1Ra,酶切出HSV1tkIREShIL1Ra片段,克隆至AAV载体质粒pSNAV2.0上,构建成重组共表达质粒pSNAV2.0HSV1tkIREShIL1Ra,酶切鉴定后,用脂质体转染上述质粒至原代骨关节炎(OA)滑膜细胞,RTPCR法鉴定共表达质粒在滑膜细胞中的表达。结果酶切鉴定证实重组共表达质粒构建正确;RTPCR检测到转染后的OA滑膜细胞中表达HSV1tk与hIL1Ra。结论成功构建了重组共表达质粒pSNAV2.0HSV1tkIREShIL1Ra;重组质粒转染OA滑膜细胞后,能表达HSV1tk与hIL1Ra。这为OA的基因治疗研究提供了理论依据。
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