刘芳,马道新,谭炳煦,高晖,王建波,张萍,郭颖,程玉峰
Construction of the recombination expression vector pIRESRb94 and its effect on expression of SphK in lung adenocarcinoma A549 cell line
LIU Fang, MA Daoxin, TAN Bingxu, GAO Hui, WANG Jianbo, ZHANG Ping, GUO Ying, CHENG Yufeng
摘要: 目的构建真核表达质粒pIRESRb94,观察Rb94基因对鞘氨醇激酶(SphK)表达的影响。方法根据Rb94基因序列设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的Rb94基因的真核表达质粒pIRESRb94,经脂质体转染A549细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用Realtime RTPCR和Western boltting法检测Rb94基因并观察其对人肺腺癌A549细胞株SphK表达的影响。结果成功构建重组表达质粒pIRESRb94,转染A549细胞后获得稳定转染细胞株pIRESRb94A549,该细胞株中Rb94基因高效表达;SphK1表达下调而SphK2表达上调。结论真核表达质粒pIRESRb94构建成功并可有效转染A549细胞,Rb94基因抑制SphK1的表达,增强SphK2的表达。
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