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山东大学学报(医学版)

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人同源盒基因NKX3.1cDNA真核表达载体的构建及表达

刘闻闻，于春晓，崔福爱，张鹏举，胡晓燕，陈蔚文，张建业， 姜安丽   

  1. 山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所， 山东 济南 250012
  • 收稿日期:2005-09-14 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-10-24 发布日期:2006-10-24
  • 通讯作者: 刘闻闻

LIU Wen-wen, YU Chun-xiao, CUI Fu-ai, ZHANG Peng-ju, HU Xiao-yan,CHEN Wei-wen， ZHANG Jian-ye, JIANG An-li   

  1. Institute of Biochemistry and Molecular Biology, School of Medicine, Shandong University, Jinan 250012, Shandong, China
  • Received:2005-09-14 Revised:1900-01-01 Online:2006-10-24 Published:2006-10-24
  • Contact: LIU Wen-wen

摘要： 目的：构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体，研究其在前列腺癌细胞PC3、LNCaP中的表达情况。方法：以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RTPCR扩增NKX3.1基因全长编码片段，T/A克隆至pCR2.1载体中。经酶切、测序鉴定后,将NKX3.1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1（+）中。将pcDNA3.1NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC3和LNCaP 细胞,RTPCR和Western blot法检测NKX3.1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达。结果：人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1NKX3.1经酶切及测序鉴定正确。 pcDNA3.1NKX3.1转染PC3和LNCaP细胞后，经RTPCR和Western blot证明在mRNA和蛋白水平均能有效表达NKX3.1。结论：成功构建了真核表达载体pcDNA3.1NKX3.1, 转染前列腺癌细胞PC3和LNCaP后能有效表达。

关键词: 基因表达, 转染 , 同源盒, 真核表达载体, 基因

Abstract: To construct recombinant eukaryotic expression vector, pcDNA3.1NKX3.1 and express it in prostate cancer PC3 and LNCaP cells. Methods： The NKX3.1 complete decoding sequence was amplified by RTPCR by using RNA from LNCaP cell and was cloned into pCR2.1 vector by T/A ligation, and then into pcDNA3.1(+) vector to generate pcDNA3.1NKX3.1 which was instantaneously transfected into prostate cancer PC3 and LNCaP cells. The expression of NKX3.1 mRNA and protein was verified by RTPCR and Western blot. Results： The sequence of cloned NKX3.1 cDNA was identical to that documented in GeneBank. RTPCR and Western blot results indicated that NKX3.1 cDNA was effectually expressed in the transfected PC3 and LNCaP cells. Conclusion： The eukaryotic expression vector pcDNA3.1NKX3.1 is successfully constructed and effectually expressed in PC3 and LNCaP cells.

Key words: Genes, homeobox, Eukaryotic expression vector, Gene expression, TransfectionNKX3.1

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