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刘闻闻,于春晓,崔福爱,张鹏举,胡晓燕,陈蔚文,张建业, 姜安丽
LIU Wen-wen, YU Chun-xiao, CUI Fu-ai, ZHANG Peng-ju, HU Xiao-yan,CHEN Wei-wen, ZHANG Jian-ye, JIANG An-li
摘要: 目的:构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC3、LNCaP中的表达情况。方法:以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RTPCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,T/A克隆至pCR2.1载体中。经酶切、测序鉴定后,将NKX3.1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。将pcDNA3.1NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC3和LNCaP 细胞,RTPCR和Western blot法检测NKX3.1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达。结果:人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1NKX3.1经酶切及测序鉴定正确。 pcDNA3.1NKX3.1转染PC3和LNCaP细胞后,经RTPCR和Western blot证明在mRNA和蛋白水平均能有效表达NKX3.1。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1NKX3.1, 转染前列腺癌细胞PC3和LNCaP后能有效表达。
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