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山东大学学报(医学版) ›› 2013, Vol. 51 ›› Issue (12): 20-24.

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Livin shRNA真核表达载体构建及其对HepG2细胞化疗敏感性的影响

徐威,常宏,翟云鹏   

  1. 山东大学附属省立医院普外科,济南 250021
  • 收稿日期:2013-01-07 出版日期:2013-12-10 发布日期:2013-12-10
  • 通讯作者: 常宏,E-mail:changh111@hotmail.com
  • 基金资助:

    山东省自然科学基金(Y2008C110)

Construction of Livin shRNA eukaryotic expression vector and its influence on chemotherapeutic sensitivity of HepG2 cells

XU Wei, CHANG Hong, ZHAI Yun-peng   

  1. Department of General Surgery, Shandong Provincial Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250021, China
  • Received:2013-01-07 Online:2013-12-10 Published:2013-12-10

摘要:

目的   构建针对Livin基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,探讨其对肝肿瘤HepG2细胞化疗敏感性的影响。方法    设计并构建针对Livin基因的shRNA真核表达载体pSD11-U6/Neo/GFP/Livin,脂质体法转染肝肿瘤HepG2细胞。荧光定量PCR、Western blotting检测细胞Livin mRNA和蛋白的相对表达水平。顺铂(2.0mg/L)处理后,MTT法检测细胞生长抑制率。结果   测序分析证实针对Livin基因的shRNA真核表达载体构建成功,转染肝肿瘤HepG2细胞后可降低Livin mRNA和蛋白的相对表达量(P<0.05),顺铂对转染Livin表达载体的HepG2细胞抑制率明显高于未转染细胞(P<0.05)。结论   成功构建Livin shRNA真核表达载体,且有效抑制HepG2细胞中Livin基因的表达,增强肝肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

关键词: Livin基因;RNA干扰;肝细胞肝肿瘤

Abstract:

Objective   To construct a short hairpin RNA (shRNA) eukaryotic expression vector targeting to the Livin gene, and explore its influence on chemotherapeutic sensitivity of HepG2 cells. Methods   The Livin shRNA eukaryotic expression vectors pSD11-U6/Neo/GFP/livin were designed, constructed and transfected stably into HepG2 cells. The Livin mRNA and protein relative expression were detected by fluorescence quantitative PCR and Western blotting. MTT was used to evaluate the inhibition rate of HepG2 cells after exposure to cisplatin (2.0mg/L).  ResultsThe DNA sequencing confirmed that the Livin shRNA eukaryotic expression vectors were successfully constructed. Transfection of the vectors could significantly decrease the Livin mRNA and protein relative expression of HepG2 cells (P<0.05). The inhibition rate of cisplatin in transfected cells were obviously higher than those in the untransfected cells (P<0.05). Conclusion    The shRNA eukaryotic expression vectors targeting to the Livin gene are constructed successfully. Transfection of the vectors can effectively decrease the expression of Livin gene in HepG2 cells, and increase the sensitivity of HepG2 cells to chemotherapy.

Key words: Livin gene; RNA interference; Hehapocellular neoplasm

中图分类号: 

  • R735.7
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