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山东大学学报(医学版) ›› 2013, Vol. 51 ›› Issue (9): 45-49.

• 基础医学 • 上一篇    下一篇

STAT3真核表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖的影响

王晓蕾1,郏雁飞2,郑燕2,刘华2,汪运山2   

  1. 1.山东大学医学院, 济南 250012; 2. 山东大学附属济南市中心医院中心实验室,济南250013
  • 收稿日期:2012-12-19 出版日期:2013-09-10 发布日期:2013-09-10
  • 通讯作者: 汪运山,E-mail:sdjnwys@163.com;郑燕,E-mail:cnfu@sina.com
  • 基金资助:

    国家自然科学基金(81000869);山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2011YY039);国家重点基础研究发展计划(973计划:2012CB966503,2012CB966504)

Construction of STAT3 eukaryotic over-expression vector and its effects on the proliferation of gastric cancer cells

WANG Xiao-lei1, JIA Yan-fei2, ZHENG Yan2, LIU Hua2, WANG Yun-shan2   

  1. 1. School of Medicine, Shandong University,Jinan 250012, China;
    2. Central Laboratory, Jinan Central Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250013, China
  • Received:2012-12-19 Online:2013-09-10 Published:2013-09-10

摘要:

目的   构建人信号转导和转录激活因子3(STAT3)真核表达载体,研究STAT3基因对人胃癌细胞株MGC803的影响。方法   构建pcDNA3-STAT3真核表达质粒,经脂质体介导转染胃癌细胞株MGC803。RT-PCR和Western blotting检测转染后STAT3、P-STAT3(Y705)、P-STAT3(S727)、Survivin 和 PCNA在MGC803细胞中mRNA和蛋白水平的表达,CCK-8法检测pcDNA3-STAT3对细胞MGC803的影响。结果   测序及酶切鉴定证实,真核表达质粒pcDNA3-STAT3构建成功。Western blotting和RT-PCR实验结果证实,与转染空载体组相比,转染重组质粒组STAT3、P-STAT3(Y705)、P-STAT3(S727)、Survivin 和 PCNA在蛋白水平和mRNA水平的表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验结果显示,与转染空载体组相比,转染重组质粒组人胃癌细胞株MGC803增殖能力明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论      真核表达质粒pcDNA3-STAT3可以提高STAT3基因在人胃癌细胞株MGC803中的表达,并且增强胃癌细胞的增殖能力。

关键词: 胃肿瘤;信号转导和转录激活因子3;细胞增殖能力

Abstract:

Objective     To investigate the effects of overexpression human signal transducer and activator of transcription 3(STAT3) on human gastric cancer cell line MGC803 by the construction of a STAT3 gene eukaryotic expression vector. Methods    The eukaryotic expression vector pcDNA3-STAT3 was constructed and transfected into the gastric cancer cell line(MGC803) by the liposome. The mRNA and protein expression levels of STAT3, P-STAT3(Y705), P-STAT3(S727), Survivin and PCNA in MGC803 were detected by RT-PCR and Western blotting. The effects of STAT3 on MGC803 cell proliferation were detected through the CCK-8 assay. Results   The DNA sequencing and restriction endonuclease identification results confirmed that the eukaryotic expression plasmid pcDNA3-STAT3 was successfully constructed. Western blotting and RT-PCR results confirmed that STAT3, P-STAT3(Y705), P-STAT3(S727), Survivin and PCNA protein and mRNA expression levels were significantly increased in the recombinant plasmid group compared with the empty vector group. CCK-8 results proved that, compared with the empty vector group,the recombinant plasmid group showed higher proliferative capacity, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion    eukaryotic expression plasmids of pcDNA3-STAT3 can increase the expression of STAT3 gene in human gastric cancer cell line MGC803, and enhance the proliferation of gastric cancer cells.

Key words: Stomach neoplasm; Signal transducer and activator of transcription 3; Cell proliferating ability

中图分类号: 

  • R735.2
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