特异性siRNA抑制HPV16 E7基因表达的实验研究

山东大学学报(医学版) ›› 2009, Vol. 47 ›› Issue (11): 64-67.

特异性siRNA抑制HPV16 E7基因表达的实验研究

张晓,王传新,李伟,郑桂喜,张建,阚士锋,王立水

山东大学齐鲁医院检验科, 济南 250012

收稿日期:2009-03-06 发布日期:2009-11-16
通讯作者: 王传新（1963- ），男，教授，博导，研究方向为肿瘤免疫与分子生物学。 Email:wcx6601@126.com
作者简介:张晓（1983- ），女，硕士研究生，主要从事肿瘤免疫的研究。Email：zhangxiaodb@163.com
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(30672010)。

Specific siRNA inhibits HPV16 E7 gene expression: an experimental study

ZHANG Xiao, WANG Chuanxin, LI Wei, ZHENG Guixi, ZHANG Jian, KAN Shifeng， WANG Lishui

Department of Clinical Laboratory, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, China

Received:2009-03-06 Published:2009-11-16

摘要/Abstract

摘要：

目的筛选针对HPV16 E7基因有效的siRNA，探讨其对HaCaTE7 细胞中HPV16 E7 mRNA及细胞表面HLAⅠ类分子表达的影响。方法采用化学法合成3条HPV16 E7特异性siRNA，应用转染试剂Lipofectamine2000将其转染入HaCaTE7细胞，采用实时荧光定量PCR（RTPCR）检测HPV16 E7 mRNA的表达，采用流式细胞术（FCM）检测细胞表面HLAⅠ类分子的表达。结果3条siRNA均能有效抑制HaCaTE7细胞中HPV16 E7的转录表达，以siRNA2作用效果最明显，抑制率达75%，细胞膜表面HLAⅠ类分子的表达明显上调，平均荧光强度(MFI)为130.18±1.07，高于空转染对照组（100.32±3.01）和非特异性siRNA对照组（100.82±2.87）。结论化学合成的HPV16 E7特异性siRNA能有效抑制HaCaTE7细胞中E7 mRNA的表达，同时使细胞表面HLAⅠ类分子表达上调。

关键词: 乳头状瘤病毒，人；HLA抗原；基因；RNA干扰；HaCaT细胞

Abstract:

To screen an effective HPV16 E7 specific siRNA and investigate its effect on expression of HPV16 E7 mRNA and cell surface HLA class I antigen in HaCaTE7 cells. MethodsThree HPV16 E7 specific siRNAs were chemically synthesized and transfected into HaCaTE7 cells by Lipofectamine2000. Expression of HPV16 E7 mRNA was determined by realtime PCR while expression of cell surface HLA class I antigen was determined by flow cytometry（FCM）. ResultsAll three siRNAs effectively inhibited expression of HPV16 E7 mRNA in HcaCaTE7 cells. Of the siRNAs, siRNA2 was the most effective and its inhibitory rate reached 75%. Expression of cell surface HLA class I antigen was obviously upregulated. Posttransfected average mean fluorescence intensity (MFI) of HaCaTE7 cell surface HLA class I antigen was 130.18±1.07, which was significantly higher than that in the mock control group (100.32±3.01) and the nonspecific siRNA control group (100.82±2.87). ConclusionHPV16 E7 specific siRNA can effectively inhibit expression of

Key words: Papillomavirus， human； HLA antigens; Genes; RNA interference; HaCaT cells

中图分类号:

R737.33

张晓,王传新,李伟,郑桂喜,张建,阚士锋,王立水. 特异性siRNA抑制HPV16 E7基因表达的实验研究[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(11): 64-67.

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