负载hTERT基因片段的慢病毒的包装及表达

山东大学学报(医学版)

负载hTERT基因片段的慢病毒的包装及表达

崔丽萍¹，崔晶²，时昌文³，孙青²

1. 山东大学医学院，济南 250012； 2. 山东大学附属千佛山医院病理科，济南 250014；3. 山东大学附属千佛山医院普外中心实验室，济南 250014

收稿日期:2007-09-18 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-02-16 发布日期:2008-02-16
通讯作者: 崔丽萍

Package and expression of lentivirus encoding hTERT gene

CUI Li-ping¹，CUI Jing²，SHI Chang-wen³，SUN Qing²

1. School of Medicine, Shandong University, Jinan 250012, China;2. Department of Pathology, Qianfoshan Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250014, China;

Received:2007-09-18 Revised:1900-01-01 Online:2008-02-16 Published:2008-02-16
Contact: CUI Li-ping

摘要/Abstract

摘要： 目的构建编码人端粒酶逆转录酶（hTERT）的慢病毒载体，并测定其滴度，观察hTERT 基因在体外的表达情况。方法采用RT-PCR获得hTERT基因片段，插入转移载体L166，用CaCl2法L166-hTERT、L205、L311共转染293T细胞包装慢病毒，测定病毒滴度，免疫细胞化学法检测慢病毒感染的293T细胞中hTERT的表达。结果测序结果显示成功构建了重组质粒L166-hTERT，测定未经浓缩的病毒滴度为5.25×106IU/mL，免疫细胞化学法检测到慢病毒感染的293T细胞中hTERT呈阳性表达。结论成功构建了负载hTERT基因片段的慢病毒，hTERT能在感染的293T细胞中高效表达，表达持续2个月以上。

Abstract: To construct a lentiviral vector encoding human telomerase reverse transcriptase(hTERT)genes. MethodsA fragment of the hTERT gene was amplified by RT-PCR and was inserted into the plasmid L166. The three plasmids L166hTERT, L205 and L311 co-transfected the virus packaging cell line 293T using the CaCl₂ method. Then the cell supernatant was harvested and virus titration was determined. Also the expression of hTERT in 293T cells infected by the lentivirus was determined by using the immunocytochemistry method. Results DNA sequencing demonstrated that the recombinant plasmid L166hTERT was successfully constructed. The titration of the un-concentrated lentivirus was 5.25×10⁶IU/mL. hTERT polypeptid immunocytochemistry staining proved positive for the hTERT gene in infected 293T cells. Conclusion Lentivirus encoding hTERT was successfully packaged and hTERT could express in 293T cells for more than 2 months.

Key words: Human telomerase reverse transcriptase, Lentivirus vector, Tumor vaccine

中图分类号:

R730.5

崔丽萍,崔晶,时昌文,孙青 . 负载hTERT基因片段的慢病毒的包装及表达[J]. 山东大学学报(医学版), 2008, 46(2): 132-135.

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