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山东大学学报(医学版)

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人脐血干细胞培养及其向神经元样细胞定向诱导分化的研究

陈增海,马万里1,高春正1,陈鹏1,任鹏1,姜夕峰2,李贵新2   

  1. 1. 山东大学第二医院骨科,山东 济南 250033; 2. 山东省脐血干细胞库, 山东 济南 250002
  • 收稿日期:2006-03-29 修回日期:1900-01-01 发布日期:2006-11-24
  • 通讯作者: 陈增海

Umbilical cord blood stem cells: culture and

CHEN Zeng-hai,MA Wan-li,GAO Chun-zheng,CHEN Peng,REN Peng,JIANG Xi-feng,LI Gui-xin   

  1. 1. Department of Orthopedics, Second Hospital of Shandong University, Jinan 250033, Shandong, China2. Shandong Library of Cord Blood Stem Cell, Jinan 250002, Shandong, China
  • Received:2006-03-29 Revised:1900-01-01 Published:2006-11-24
  • Contact: CHEN Zeng-hai

摘要: 目的:通过体外培养脐血干细胞并诱导分化为神经元样细胞,为研究脐血干细胞移植修复脊髓损伤奠定基础。方法:用密度梯度离心法将脐血单个核细胞从脐血中分离出来,置于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中培养、扩增、传代,取体外扩增5代的脐血间充质干细胞(MSCs),接种于培养板内,将诱导剂3-叔丁基4-羟基茴香醚(BHA)和二甲基亚砜(DMSO)加入条件培养基静置培养,观察细胞的形态学和组织学变化,取神经元样细胞进行免疫组化检测细胞表面标志物神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP),然后,在光镜下随机数取10个非重叠视野(×100), 计算NSE、NF及GFAP阳性细胞占总细胞数的比例,实验结果用统计学分析。结果:光镜下hMSC在预诱导液中处理24?h后,加入诱导液,1?h后细胞形态发生变化,原来宽大扁平的hMSCs胞质向核收缩,胞体向胞核收缩成锥形且变得致密并有折光性,有较多的长突起,6?h后多数细胞均转变为类似于神经元的形态,3?d后免疫组化检测NSE、NF及GFAP的阳性率分别为(35.24±3.63)%、(33.46±3.21)%、(15.12±1.65)%。结论:脐血MSC在体外有较强的扩增能力,并且在一定条件下可以诱导成为神经元样细胞。

关键词: 诱导分化 , 干细胞, 神经元样细胞, 胎血

Abstract: To study an experimental technology for repairing injured spine by transplantation of cord blood stem cells. Methods: (Human mesenchymal stem cells, hMSCs) were separated from cord blood by density gradient centrifuging and cultured in DMEM with 20% FBS. Amplified and taken the 5th generation to have an innoculation in the culture plate, they were put into the culture medium added inducer and cultivated at 37?℃, 5% CO2 in satured humidity. The neuron symbol NSE, NF and the astrocyte symbol GFAP were detected by immunohistochemical method, then under the microscope, 10 unwraped eyeshot was counted randomly and calculated the positive percentage of NSE, NF and GFAP denoting as ±s. Result: The hMSCs seemed like neurons and changed into taper cells with many long tuber and cytoplast shrinking to the nucleus which became denser and more refracting. Twentyfour hours after hMSCs were incubated in beforehand 3.63)% of NSE, (33.46±3.21)% of NF and (15.12±1.65)% of GFAP were found. Conclusion: Cord blood stem cells have a relatively strong ability of proliferation and a potent of differentiating into neuronlike cells at a certain condition.

Key words: Fetal blood, Stem cells, Neuronlike cells, Differentiation

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