山东大学学报(医学版) ›› 2012, Vol. 50 ›› Issue (12): 25-30.
于洋1,赵健2,钟铠泽2,刘春艳1,李艺3,史婧3,陈蔚文1,姜安丽1
YU Yang1, ZHAO Jian2, ZHONG Kai-ze2, LIU Chun-yan1, LI Yi3,
SHI Jing3, CHEN Wei-wen1, JIANG An-li1
摘要:
目的 构建人miR-147a真核表达载体,检测其在肺腺癌细胞A549中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增miR-147a的前体序列(pri-mir-147a),插入表达载体pSilencer4.1-CMV neo,构建pSilencer4.1-147a重组载体,转染A549细胞,qRT-PCR和报告基因分析检测miR-147a的表达;MTT分析检测外源性miR147a过表达对A549细胞增殖能力的影响;Matrigel侵袭实验检测外源性miR-147a过表达对A549细胞侵袭能力的影响;报告基因分析检测miR147a对常见肿瘤信号途径的影响。结果 限制性酶切和DNA测序证实pSilencer4.1-147a构建正确;pSilencer4.1-147a转染A549细胞后,qRT-PCR和报告基因分析检测到明显的外源性miR-147a表达;MTT分析和Matrigel侵袭实验结果显示,miR-147a过表达可明显抑制A549细胞的增殖和侵袭能力;报告基因分析结果显示,miR-147a过表达可显著下调pGL4.23-AP1、pGL4.23-ELK1、pGL4.23-cMYC的相对荧光素酶活性。结论 成功构建的人miR-147a真核表达载体能够在肺腺癌细胞A549中有效表达,并对A549细胞的增殖和侵袭产生抑制作用,该作用可能与miR-147a对EGFR-RAS-MAPK途径的抑制有关。
中图分类号:
[1] | . 吉非替尼联合塞来昔布对肺腺癌细胞凋亡和EGFR、COX2表达的影响[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(8): 37-41. |
[2] | 郝可可1,朱际平2,于力克1. Survivin检测在肺肿瘤胸腔积液诊断中的临床价值[J]. 山东大学学报(医学版), 2010, 48(12): 129-133. |
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