制备肠道病毒71型黏膜疫苗的初步探索

山东大学学报(医学版) ›› 2012, Vol. 50 ›› Issue (2): 25-.

制备肠道病毒71型黏膜疫苗的初步探索

李志会，岳盈盈，宋楠楠，李鹏，孟红

山东省医学科学院基础医学研究所，山东省罕少见病重点实验室，济南 250062

收稿日期:2011-10-13 出版日期:2012-02-10 发布日期:2012-02-10
通讯作者: 孟红(1960- )，女，研究员，主要从事医学病毒学研究。 E-mail：menghyky@yahoo.com.cn
作者简介:李志会(1978- )，男，硕士研究生，助理研究员，主要从事医学病毒学研究。
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(81000720)；山东省自然科学基金资助项目(2009ZRC03096)

Toward constructing a mucosa vaccine for enterovirus 71

LI Zhi-hui, YUE Ying-ying, SONG Nan-nan, LI Peng, MENG Hong

Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Key Laboratory of
Rare and Uncommon Diseases, Jinan 250062, China

Received:2011-10-13 Online:2012-02-10 Published:2012-02-10

摘要/Abstract

摘要：

目的利用同源重组技术将肠道病毒71型衣壳蛋白VP1基因重组入枯草芽胞杆菌基因组，进而将VP1蛋白展示在其芽胞表面制备EV71黏膜疫苗。方法将枯草芽胞杆菌CotB基因与VP1基因连接后插入整合质粒pDG1662, 得到重组质粒pDG1662-CotB-VP1，电转化法转化枯草芽胞杆菌1A771，抗生素抗性筛选，PCR、Western-Blot、免疫荧光鉴定VP1基因重组及蛋白表达情况。结果 VP1基因成功重组入枯草芽胞杆菌基因组中，VP1蛋白在芽胞表面得到了有效表达。结论 EV71衣壳蛋白在枯草芽胞杆菌芽胞表面得到了有效表达，为研究EV71黏膜疫苗奠定基础。

关键词: 肠道病毒71型；病毒结构蛋白VP1；黏膜疫苗；枯草芽胞杆菌芽胞

Abstract:

Objective To introduce a recombinant VP1 gene of EV71 into the Bacillus subtilis genome by means of homologous recombination to display VP1 on the spore as a mucosa vaccine for enterovirus 71. Methods A recombinant VP1 gene fused with the Bacillus subtilis CotB gene was introduced into integration vector pDG1662 to generate plasmid pDG1662-CotB-VP1. Bacillus subtilis 1A771 was transformed with linearized pDG1662-CotB-VP1 by means of electroporation. Recombinant strains were screened by antibiotic resistance and were identified by PCR, Western-Blot and immunofluorescence microscopy. Result The VP1 gene was integrated into the Bacillus subtilis genome and the VP1 protein was displayed on the spore′s surface. Conclusion The success of VP1 protein expression on the spore′s surface is a major achievement toward constructing a mucosa vaccine for enterovirus 71.

Key words: Enterovirus 71； Virus structure protein VP1； Mucosa vaccine； Bacillus subtilis spores

中图分类号:

R373.2

李志会，岳盈盈，宋楠楠，李鹏，孟红. 制备肠道病毒71型黏膜疫苗的初步探索[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(2): 25-.

LI Zhi-hui, YUE Ying-ying, SONG Nan-nan, LI Peng, MENG Hong. Toward constructing a mucosa vaccine for enterovirus 71[J]. JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY (HEALTH SCIENCES), 2012, 50(2): 25-.

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