山东大学学报(医学版) ›› 2011, Vol. 49 ›› Issue (5): 135-139.
刘健,王法刚,曹永倩,徐倩,徐荣建
LIU Jian, WANG Fa-gang, CAO Yong-qian, XU Qian, XU Rong-jian
摘要:
目的 探讨正、反义血管内皮生长因子(VEGF)基因对人增生性瘢痕成纤维细胞(HHSFb)增殖行为的影响。方法采用组织块法获取HHSFb,行细胞免疫化学鉴定。构建靶向VEGF基因pcDNA3.1(+)/hVEGF165(正义组)、pcDNA3.1(-)/hVEGF165(反义组)和空质粒pcDNA3.1(+)(空载体组)转染人成纤维细胞,以及未行转染处理的人成纤维细胞(对照组),共设为4组。经G418筛选获得阳性转染细胞克隆。逆转录-多聚酶链式反应(RTPCR) 显示VEGF基因在细胞内的表达,上清行酶联免疫吸附反应( ELISA) 检测VEGF蛋白表达水平,MTT 测定细胞体外生长情况。结果 成功构建正、反义VEGF基因表达载体。经统计学分析,与对照组和空载体相比,正义组VEGF mRNA表达增强,蛋白表达增强;反义组VEGF mRNA表达明显减弱,蛋白表达明显降低。MTT结果显示,转染前后细胞体外生长速度基本一致。结论 正义VEGF基因重组质粒对HHSFb内源性VEGF的表达有促进作用,反义VEGF基因重组质粒可有效抑制HHSFb内源性VEGF的表达。
中图分类号:
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