RNA干扰沉默人血管平滑肌细胞胱抑素C基因表达及对组织蛋白酶S表达的影响

山东大学学报(医学版) ›› 2009, Vol. 47 ›› Issue (7): 49-53.

RNA干扰沉默人血管平滑肌细胞胱抑素C基因表达及对组织蛋白酶S表达的影响

刘玉胜¹，鹿庆华¹，王群²，蒋卫东¹，盛林¹，杜贻萌¹，郝林¹，王光允¹

山东大学 1. 第二医院心内科，济南 250033； 2. 校医院，济南 2501001.

收稿日期:2008-07-07 发布日期:2009-07-16
通讯作者: 鹿庆华（1964- ），男，博士，教授，主要从事临床冠脉介入治疗及术后再狭窄的基础与临床干预研究。Email:lqhzhy@163.com
作者简介:刘玉胜(1976- )，男，硕士，主治医师，主要从事心血管急症的临床诊治。
基金资助:
山东省中医药管理局科学技术研究专项课题基金（2005043）；山东省自然科学基金资助项目（Y2005C12）。

siRNA inhibits expression of Cystatin C in human vascular smooth muscle cells and effects expression of Cathepsin S

LIU Yusheng¹, LU Qinghua ¹,　　WANG Qun ²,　JIANG Weidong ¹ ,　SHENG Lin ¹,
DU Yimeng ¹,　HAO Lin ¹,　WANG Guangyun ¹

Department of Cardiology, Second Hospital of Shandong University, Jinan 250033, China;
2. Shandong University Hospital, Jinan 250100, China

Received:2008-07-07 Published:2009-07-16

摘要/Abstract

摘要：

目的研究小干扰RNA（siRNA）对胱抑素C（CysC）基因表达的抑制作用及对组织蛋白酶S（CatS）表达的影响。方法利用Ambion公司设计合成的以CysC为靶标的siRNA，通过脂质体转染人血管平滑肌细胞（VSMC），以未转染siRNA细胞和转染无关siRNA细胞为对照，采用RTPCR和Western blot分别检测CysC在mRNA水平和蛋白水平的改变。选取抑制效率最高siRNA转染VSMC，以空白对照组、无关干扰组和CysC高表达组为对照，采用RTPCR法和Western blot分别检测CatS在mRNA水平和蛋白水平的改变。结果转染24?h后，siRNA组CysC mRNA和蛋白表达均被有效抑制，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P<0.01），其中，siRNA2的抑制效率最高。CatS的mRNA及蛋白表达水平在siRNA组均有明显升高，与其他三组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。结论体外转录合成的siRNA可有效抑制人VSMC中CysC的表达，并对CatS基因表达有一定影响。

关键词: 基因表达；胱抑素C；组织蛋白酶S；血管平滑肌细胞

Abstract:

To evaluate the effect of small interference RNA(siRNA) on Cystatin C in human vascular smooth muscle cells and its effect on expression of Cathepsin S. MethodssiRNA targeting Cystatin C was constructed by an online design of Ambion company and transfected into human vascular smooth muscle cells. The nontransfected cells and cells treated with the control siRNA served as controls. mRNA and protein expressions of Cystatin C were detected by RTPCR and Western blot respectively. Compared with the nontransfected cells, cells treated with control siRNA and cells highly expressing Cystatin C, the mRNA and protein expressions of Cathepsin S in cells treated with control siRNA whose interfering rate was the highest were detected by RTPCR and Western blot respectively. ResultsAt 24hour posttransfection, mRNA and protein expressions of Cystatin C were efficiently inhibited in siRNA treated cells compared with the control cells(P<0.01), especially in siRNA2 treated cells. mRNA and protein expressions of Cathepsin S were significantly increased in the siRNA treated group compared with the other three groups (P<0.01). ConclutionsiRNA in vitro transcription can inhibit Cystatin C gene expression in human vascular smooth muscle cells, which may effect expression of Cathepsin S.

Key words: Gene expression; Cystatin C; Cathepsin S; Vascular smooth muscle cell

中图分类号:

R541.4

. RNA干扰沉默人血管平滑肌细胞胱抑素C基因表达及对组织蛋白酶S表达的影响[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(7): 49-53.

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