神经特异性启动子PDGF-EGFP载体的构建及组织表达特异性鉴定

山东大学学报(医学版) ›› 2009, Vol. 47 ›› Issue (5): 50-53.

神经特异性启动子PDGF-EGFP载体的构建及组织表达特异性鉴定

任凯丁岩崔云燕杨玲玲张静崔行

1．西安医学院生物化学教研室，西安 710021； 2．西安交通大学生命科学与技术学院生物工程系，西安 710049；3．济南市中心医院，济南 250013； 4．山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所，济南 250012

收稿日期:2008-10-10 出版日期:2009-06-16 发布日期:2009-05-16
通讯作者: 崔行，教授，博导，主要从事神经疾病的分子生物学研究。
作者简介:任凯（1979- ），男，助教，主要从事肿瘤分子生物学研究。E-mail: renkai_bio@yahoo.com.cn
基金资助:
高等学校博士学科点专项科研基金（No.20050422045）。

Construction of nervous specific promoter PDGF-EGFPvector and identification of tissue specificity

REN Kai, DING Yan, CUI Yun-Yan, YANG Ling-Ling, ZHANG Jing, CUI Xing

1. Department of Biochemistry, Xi′an Medical University, Xi′an 710021, China; 2. Department of Biochemistry and Molecular Biology, Life and Science School, Xi′an Jiaotong University, Xi′an 710049, China; 3. Jinan Central Hospital, Jinan 250013, China; 4. Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Medicine, Shandong University, Jinan 250012, China

Received:2008-10-10 Online:2009-06-16 Published:2009-05-16

摘要/Abstract

摘要：

目的构建含有神经特异性启动子PDGF的绿色荧光蛋白真核表达载体，并进行组织特异性鉴定。方法提取人外周血基因组DNA，采用PCR技术扩增PDGF-B链上游启动子序列，将其定向克隆至增强型绿色荧光蛋白报告基因表达质粒pEGFP-1中，构建真核表达载体pPDGF-EGFP。将重组载体转染至人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH，以及4种其他组织来源细胞系，观察绿色荧光蛋白表达以鉴定其神经特异性。结果成功构建表达载体pPDGF-EGFP，经转染显示pPDGFEGFP在人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中高表达，而在其它4种非神经组织来源细胞株中极少量表达或未见表达。结论重组真核表达载体pPDGF-EGFP有较高的神经组织特异性，为进一步研究神经系统疾病的靶向基因治疗奠定了基础。

关键词: 血小板源性生长因子, 神经特异性启动子, 细胞株

Abstract:

Objective To construct an expression vector of enhanced green fluorescent protein (EGFP) containing nervous tissue-specific promoter-PDGF. Methods The PDGF-promoter sequence was amplified by PCR and the template was the genome of human blood cells. The PCR products were cloned into the pEGFP-1 vector and then pP DGF-EGFP vector was constructed. The vector was transfected into human neuroblastoma cells, SK-N-SH and four kinds of non-nervous recourse cells by lipofectamine. Expression of EGFP of transfected cells and tissue specificity of the vector were determined by transfection. Results The vector of pPDGF-EGFP was successfully constructed. After a transfection experiment, the EGFP was highly expressed in SK-N-SH cells and scarcely expressed in the other four cells. Conclusion The vector of pPDGF-EGFP has a high nervous tissue specificity. It lays a foundation for studying target gene therapy of nervous system diseases.

Key words: latelet-derived growth factor; Nervous tissue-specific promoter; Cell lines

中图分类号:

R741.02

任凯丁岩崔云燕杨玲玲张静崔行. 神经特异性启动子PDGF-EGFP载体的构建及组织表达特异性鉴定[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(5): 50-53.

REN Kai, DING Yan, CUI Yun-Yan, YANG Ling-Ling, ZHANG Jing, CUI Xing. Construction of nervous specific promoter PDGF-EGFPvector and identification of tissue specificity[J]. JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY (HEALTH SCIENCES), 2009, 47(5): 50-53.

参考文献

相关文章 15

[1]	杨娟, 邱宗建, 宋强. 辛伐他汀对急性髓系白血病NB4细胞株DNA甲基转移酶的影响[J]. 山东大学学报（医学版）, 2015, 53(6): 28-32.
[2]	涂燕, 李振江, 汤爱平, 费妍, 李慧慧, 李剑, 贺文凤. 干扰CD147表达抑制白血病细胞SHI-1增殖及移行[J]. 山东大学学报（医学版）, 2014, 52(9): 1-5.
[3]	张欣, 郭海鹏, 王振红, 唐琳娜, 杨洁, 吴大玮. 异钩藤碱抑制PDGF-BB诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究[J]. 山东大学学报（医学版）, 2014, 52(12): 35-40.
[4]	蒲业迪，李丽珍，马道新，董珂，赵川莉，宋强，王鲁群. 硼替佐米耐药多发性骨髓瘤细胞株KM3/BTZ的建立[J]. 山东大学学报(医学版), 2013, 51(2): 33-.
[5]	李玉生，黄黎，吕其军，余永勤. 干扰素α-2b联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞生物学行为的影响[J]. 山东大学学报(医学版), 2011, 49(9): 48-.
[6]	林文俐1，刘杰2，李哲3，张楠2，刘传勇2，刘金锋1，孙玉萍2. 血小板源性生长因子受体-β、Podoplanin在非小细胞肺癌间质中的表达与癌相关成纤维细胞及淋巴管生成的关系[J]. 山东大学学报(医学版), 2011, 49(4): 85-89.
[7]	. 血小板源性生长因子介导内皮素1所致人肾小球细胞外基质的合成[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(7): 9-12.
[8]	于颖司国民赵宝. 益气活血汤对慢性肾功能衰竭大鼠CTGF、PDGF-B的影响[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(5): 54-58.
[9]	刘娟萍1 ，刘照旭1，2 ，徐忠华2 ，刘承2 , 周尊林2 ，闫磊2 ，范医东2 . PDGFC及其变体PDGFCb在肾透明细胞癌中的表达调节及意义[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(03): 81-84.
[10]	吉恺,王小玲,许爱辉,胡志敏,苑辉卿. 前列腺组织特异性启动子介导的TAT-EGFP的靶向表达[J]. 山东大学学报(医学版), 2008, 46(8): 742-746.
[11]	魏军民,候明,李丽珍,孔峰,卞继峰 . 短发夹RNA干扰表达质粒逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的研究[J]. 山东大学学报(医学版), 2008, 46(4): 349-352.
[12]	吉恺,孔峰,沈涛,王小玲,许爱辉,苑辉卿,张秀田 . 没药倍半萜成分的分离鉴定及抗肿瘤活性[J]. 山东大学学报(医学版), 2008, 46(4): 344-348.
[13]	王小玲,孔峰,许爱辉,吉恺,蔡捷,任凯,苑辉卿 . 没药倍半萜抑制前列腺癌细胞的增殖活性初探[J]. 山东大学学报(医学版), 2007, 45(12): 1189-1192.
[14]	单宁宁,邹雄,张义,杨晓静,庄学伟,王洪春,侯明 . 小鼠LAK细胞MHC表达水平对其体外杀伤肿瘤活性的影响[J]. 山东大学学报(医学版), 2007, 45(11): 1096-1100.
[15]	任　凯,苑辉卿,孔　峰,蔡　捷,王小玲,胡晓燕,徐　霞,张建业. 鞘脂激活肽真核表达载体的构建及其对前列腺癌细胞增殖的影响[J]. 山东大学学报(医学版), 2007, 45(1): 1-05.

多维度评价

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed