大鼠胰岛分离及纯化方案的改进

山东大学学报(医学版) ›› 2012, Vol. 50 ›› Issue (3): 8-.

大鼠胰岛分离及纯化方案的改进

肖芳1,2,3，李文娟1,2,3，侯新国1,2，宋君1,2，校娟1,2，王美建1,2，
刘继东1,2，邓楠1,2，周晓莹1,2，陈丽1,2

山东大学 1.内分泌代谢病研究所； 2.齐鲁医院内分泌科；
3.细胞治疗研究中心，济南 250012

收稿日期:2011-10-13 出版日期:2012-03-10 发布日期:2012-03-10
通讯作者: 陈丽(1958- )，女，教授，博士生导师，主要从事糖尿病和肥胖的基础与临床研究。 E-mail:chenli3@medmail.com.cn
作者简介:肖芳(1985- )，女，硕士研究生，主要从事糖尿病胰岛损伤和胰岛再生研究。
基金资助:
“十一五”国家科技支撑计划项目(2006BAI02B08,2009BAI80B04)；山东省自然科学基金资助项目(Z2008C05)；山东省科技攻关国际科技合作项目(2010GHZ20201)；山东大学自主创新基金(2009TS054)；济南市科技局科技明星项目(20100318)

Improved method for rat pancreatic islets isolation and purification

XIAO Fang1,2,3, LI Wen-juan1,2,3, HOU Xin-guo1,2, SONG Jun1,2, XIAO Juan1,2, WANG Mei-jian1,2,
LIU Ji-dong1,2, DENG Nan1,2, ZHOU Xiao-ying1,2, CHEN Li1,2

1. Institute of Endocrinology and Metabolism; 2. Department of Endocrinology， Qilu Hospital;
3. Centre for Cell Therapy Research, Shandong University, Jinan 250012, China

Received:2011-10-13 Online:2012-03-10 Published:2012-03-10

摘要/Abstract

摘要：

目的优化大鼠胰岛分离纯化条件，为糖尿病胰岛受损的发病机制研究及胰岛再生的应用提供必要材料。方法胆总管原位灌注胶原酶V消化胰腺并分离胰岛后，比较经典不连续密度梯度Ficoll离心法和Histopaque 1077密度离心法纯化胰岛的效果，其间观察胰腺灌注液体积及消化时间不同对大鼠胰岛分离纯化的影响，并对纯化后的胰岛进行数量、纯度和功能的体外检测。结果 Histopaque 1077密度离心法比经典不连续密度梯度Ficoll离心法可得到更多优质的胰岛(P<0.01)。两种方法获得的胰岛在高糖刺激下释放胰岛素的能力差异无统计学意义(P＞0.05)。胰腺灌注液之体积及消化时间对胰岛提取有十分重要的影响。结论 Histopaque 1077密度离心法简单易行且效率较高，有望成为纯化大鼠胰岛的首选方法，便于临床和基础研究工作的开展。

关键词: 大鼠胰岛；分离；纯化；胶原酶V

Abstract:

Objective To optimize conditions for rat pancreatic islets isolation and purification, and provide experimental data for research on the pathogenesis of islet injury in diabetes and application of islet regeneration. Methods Influences of different pancreatic perfusion volumes and digestion time on rat pancreatic islets isolation through intraductal collagenase V perfusion in situ were observed. Effects on islets purification were compared between classical discontinuous Ficoll density gradient centrifugation and Histopaque 1077 density gradient centrifugation. Afterwards, the islets were examined and their morphology, quantity, purity and function were evaluated in vitro. Results Histopaque 1077 density gradient centrifugation could yield more islets of high quality (P<0.01). Insulin release by the islets through the two different methods under high glucose condition has no differentiation(P＞0.05). Islets perfusion volumes and digestion time played significant roles in rat islets extraction. Conclusion Histopaque 1077 density gradient centrifugation, with simple operation and high yield, has a prospect to become the most effective method for rat islets purification and it will be more useful in clinical and basic research in the future.

Key words: Rat islets; Isolation; Purification; Collagenase V

中图分类号:

R587.1

肖芳1,2,3，李文娟1,2,3，侯新国1,2，宋君1,2，校娟1,2，王美建1,2，刘继东1,2，邓楠1,2，周晓莹1,2，陈丽1,2. 大鼠胰岛分离及纯化方案的改进[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(3): 8-.

XIAO Fang1,2,3, LI Wen-juan1,2,3, HOU Xin-guo1,2, SONG Jun1,2, XIAO Juan1,2, WANG Mei-jian1,2, LIU Ji-dong1,2, DENG Nan1,2, ZHOU Xiao-ying1,. Improved method for rat pancreatic islets isolation and purification[J]. JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY (HEALTH SCIENCES), 2012, 50(3): 8-.

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