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山东大学学报(医学版) ›› 2009, Vol. 47 ›› Issue (6): 15-19.

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NT4-SAC-HA2-TAT融合基因表达载体的构建及鉴定

张士宝 刘庆勇 阮喜云 陈杰 张建军 李宗武 杨广笑 王全颖   

  1. 1． 山东大学附属济南市中心医院泌尿外科， 济南 250013；2． 山东大学附属济南市中心医院神经内科， 济南 250013；  3． 西安华广生物工程公司， 西安 710025
  • 收稿日期:2008-12-04 发布日期:2009-06-16
  • 通讯作者: 刘庆勇（1962- ），男，副教授，博士，主要从事泌尿系肿瘤，肾脏移植的研究。
  • 作者简介:张士宝（1982- ），男，硕士研究生，主要从事前列腺癌的治疗。

onstruction and identification of the expression vector ofNT4-SAC-HA2-TAT fusion gene

 ZHANG Shi-Bao, LIU Qing-Yong, RUAN Xi-Yun, CHEN Jie, ZHANG Jian-Jun, LI Zong-Wu, YANG Guang-Xiao, WANG Quan-Ying   

  1. 1. Department of Urinary Surgery, Jinan Central Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250013, China; 2. Department of Neurology, Jinan Central Hospital Affiliated to ShandongUniversity, Jinan 250013, China; 3. Xi'an Huaguang Biological Engineering Co.Ltd, Xi'an 710025, China
  • Received:2008-12-04 Published:2009-06-16

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268

摘要：

目的 构建NT4-SAC-HA2-TAT融合肽cDNA克隆，探讨前列腺凋亡反应基因-4(Par-4)核心区凋亡肽(SAC)作为目的基因对前列腺癌的治疗作用。  方法 应用互为引物模板法合成两端具有NaeI和KpnI酶识别位点的SAC cDNA片段。将所得SAC和已有HA2-TAT片段克隆到具有相应酶切位点的pBV220-NT4质粒，得到pBV220-NT4-SAC-HA2-TAT重组质粒。PCR扩增NT4-SAC-HA2-TATcDNA片段，并将其克隆到pGEM-T easy中，转化细菌筛选阳性克隆，酶切鉴定，序列测定分析。  结果 经DNA测序、限制性内切酶酶切等证实，PCR获得了编码NaeI和KpnI酶切位点的SAC cDNA片段，并将NT4、SAC、HA2-TAT亚克隆于pBV220内。  结论 成功构建了NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的原核表达载体pBV220-NT4-SAC-HA2-TAT。

关键词: 前列腺凋亡反应基因-4, 融合肽, 前列腺肿瘤, 基因疗法

Abstract:

Objective To construct the prokaryocyte expression vector bearing fusion gene NT4-SAC-HA2-TATand lay a foundation for further study on the genetic therapy of prostate cancer.  Methods  By means of asymmetrical primer/template, the fragment encoding SAC was gained by the PCR method. Then the SAC/NaeI, KpnI and HA2-TAT/KpnI, and Xho I were cloned into recombinant vector pBV220-NT4/NaeI,SalI and the recombinant plasmid pBV220-NT4-SAC-HA2-TATwas obtained. The fragment NT4-SAC-HA2-TATobtained was amplified by PCR. Then the fragment was easily cloned into vector pGEM-T and was sequenced by the dideoxy-mediated chain-termination method. The cloned NT4-SAC-HA2-TATcDNA was compared with the GeneBank sequence by the DNASIS.  Results By DNA sequencing, the sequence of SAC was obtained which included NaeI andKpnI restriction enzyme sites by pcr. The fusion gene NT4-SAC-HA2-TATwas successfully sub-cloned into pBV220.  Conclusion   The recombinant vector pBV220-NT4-SAC-HA2-TATwas successfully constructed. These results lay the foundation for further research of using fusion genes to treat prostate cancer.

Key words: Par-4; fusion peptide; Prostate neoplasms; Gene therapy

中图分类号: 

  • R737.25
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