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山东大学学报(医学版)

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乙肝病毒突变位点的寡核苷酸与肽核酸阵列杂交检测

鲁艳芹1,韩金祥1,沈忠林2,朱波1   

  1. 1. 山东省医药生物技术研究中心芯片室/国家卫生部生物技术药物重点实验室, 山东 济南 250062;2. 山东省兖矿集团总医院检验科, 山东 邹城 273500
  • 收稿日期:2006-12-17 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-07-24 发布日期:2007-07-24
  • 通讯作者: 鲁艳芹

Hybridization detection of mutation sites in hepatitis B virus using oligodeoxynucleotide and PNA array

LU Yan-qin1,HAN Jin-xiang1,SHEN Zhong-lin2,ZHU Bo1   

  1. 1. Genechip Laboratory of Shandong Medicinal Biotechnology Centre, Shandong Academy of Medical Sciences,Key Laboratory for Biotech Drugs of Health Ministry;2. Department of Clinical Laboratory, Yankuang Group Hospital
  • Received:2006-12-17 Revised:1900-01-01 Online:2007-07-24 Published:2007-07-24
  • Contact: LU Yan-qin

摘要: 目的:比较利用寡核苷酸阵列和肽核酸阵列检测乙肝病毒突变位点。方法:针对乙肝病毒常见的1762A-T与1764G-A联合突变、1858C-T、 1896G-A 3个突变位点,设计寡脱氧核苷酸和肽核酸检测探针,探针经固定后分别与不对称PCR荧光标记的靶DNA杂交,扫描分析荧光信号强度,DNA序列分析3位点的变异情况。结果:对于寡核苷酸芯片,1762与1764联合位点、1858以及1896位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为1.44、1/1.24、1.05。对于肽核酸芯片,相应位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为2.8、1/3.02、1.71。DNA序列分析结果表明该样本中1858位点为突变位点,1896以及1762与1764联合位点不存在突变。结论:与寡脱氧核苷酸探针相比,肽核酸与靶DNA杂交结合能力和识别单碱基错配能力均高于相应的寡脱氧核苷酸,二者杂交结果与测序结果一致。

Abstract: Objective: To compare the oligonucleotide array and PNA array in determining mutation of HBV. Methods: Oligonucleotide and PNA probes which targeted 1762A-T and 1764G-A, 1858C-T and 1896G-A mutations and wild sites of HBV were designed and immobilized on aldehyde modified glass slides after synthesis. Target DNA was obtained by asymmetric PCR with a tamara-labeled upper primer. Result was produced by scanning and quantifying analysis after hybridization with labeled target DNA. Meanwhile, the PCR product was sequenced to analyze three mutation sites. Results: The ratio of fluorescence signals for 1762-1764 double site, 1858 and 1896 sites (wild type: mutation type) was 1.44, 1/1.24 and 1.05 in the oligonucleotide array and 2.8, 1/3.02, 1/1.71 in the PNA array. 1858T mutation and 1762A-1764G, 1896G wild sites were found in DNA sequencing. Conclusions: The oligonucleotide array and the PNA array could successfully detect the three mutation sites of HBV, which is in accordance with the result of DNA sequencing. PNA shows a high priority in attaching the target DNA and identifying the single-base mismatch.

Key words: Mutation, Hybridization, Oligonucleotide array, PNA array, Hepatitis B viruses

中图分类号: 

  • R373.2
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