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刘义庆1,2,王来城2,焦玉莲2,张捷2,马春燕2,崔彬2,高新谱2,刘正敏2,张雪2,赵跃然1,2
LIU Yiqing1,2,WANG Lai-cheng2,JIAO Yu-lian2,ZHANG Jie2,MA Chunyan2,CUI Bin2,GAO Xinpu2,LIU Zheng-in2,HANG Xue2,ZHAO Yue-ran1,2
摘要: 基因,构建其真核表达载体并探讨在真核细胞中的表达。方法:提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)扩增hIL26基因;目的片段与pMD18T载体连接,转化大肠杆菌E.coliDH5α,菌落PCR、酶切分析和DNA序列分析鉴定重组克隆。用SalⅠ和EcoRⅠ将目的片段切下,插入pIRES2EGFP的相应位点,构建表达载体pIRES2EGFP/hIL26并进行酶切鉴定。将重组质粒用非脂质体试剂Fugene 6转染至COS7细胞中。结果:重组克隆载体pMD18T/hIL26内插入片段序列与GenBank上报道的hIL26基因序列完全一致;pIRES2EGFP/hIL26经酶切鉴定与预期结果一致;荧光显微镜观察可见转染后的细胞有荧光出现,Western blotting 鉴定证明hIL26基因得到了有效表达。结论:成功构建了hIL26基因的真核表达载体并在真核细胞中获得了有效表达。
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