人外周血内皮前体细胞的分离、培养及流式细胞仪动态检测

山东大学学报(医学版)

人外周血内皮前体细胞的分离、培养及流式细胞仪动态检测

秦宏伟1，2，肖东杰1，刘杰3，胡安拉1，马晓丽1，汪运山1，张红卫4

1. 济南市中心医院医学实验诊断中心，山东济南 250013;2. 济宁师范专科学校生物系，山东曲阜 273155;

收稿日期:2006-09-29 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-12-24 发布日期:2006-12-24
通讯作者: 秦宏伟

QIN Hongwei1,2, XIAO Dongjie1,　LIU Jie3,　HU An-la1,　MA Xiao-li1,　WANG Yun-shan1,　ZHANG Hong-wei4

1. Center of Medical Laboratory Diagnosis, Jinan Central Hospital, Clinical Medical College of Shandong University,Jinan 250013, Shandong, China; 2. Department of Biology, Jining Teachers′ College, Qufu 273155,Shandong, China

Received:2006-09-29 Revised:1900-01-01 Online:2006-12-24 Published:2006-12-24
Contact: QIN Hong-wei

摘要/Abstract

摘要： 目的:建立人外周血内皮前体细胞（EPCs）分离、诱导的方法，并利用流式细胞仪鉴定人内皮前体细胞的培养效果，为血管生成的细胞治疗研究奠定基础。方法：Ficoll密度梯度离心提取单个核细胞（MNCs），接种在人纤连蛋白包被的培养板上，培养于EGM2MV中，4?d后，粘附细胞用DilACLDL和FITCUEA1染色，采用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察。第4天到第7天，应用流式细胞仪动态检测粘附细胞表面标志CD34、CD31、KDR。结果：MNCs培养4?d后，荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜下可观察到DilACLDL和FITCUEA1双阳性的粘附细胞，流式细胞仪检测结果显示，CD34、CD31、KDR阳性细胞表达率分别为（2.50±1.47）%、（5.72±1.66）%、（36.24±3.24）%。第5、6和7天，CD34和CD31阳性细胞阳性率分别为（8.45±3.97）%、（22.52±3.86）%，（14.13±2.79）%、（42.76±3.67）%，（21.14±2.91）%、（54.67±3.44）%。结论：外周血中确实存在EPCs，并且在体外能被诱导分化为成熟的内皮细胞。

关键词: 细胞培养, 表面标志 , 内皮前体细胞

Abstract: To establish the method of isolation of endothelial progenitor cells（EPCs）from human peripheral blood and identify the markers of EPCs by FACS to provide basis for angiogenesis therapy. Methods: Total mononuclear cells (MNC) were isolated from peripheral blood by Ficoll density gradient centrifugation, Results：Adherent cells doublepositive for DilACLDL and FITCUEA1 could be observed under fluorescent and confocal laser microscope at 4 days after culture.KDR was (2.50±1.47)%,(5.72±1.66)% and (36.24±3.24)%, respectively at day 4 of culture. At days 5, 6 and 7, CD34+ cells were (8.45±3.97)%, (14.13±2.79)% and (21.14±2.91)% and CD31+ cells were (22.52±3.86)%， (42.76±3.67)% and (54.67±3.44)%, respectively. Conclusion：EPCs exist in the peripheral blood and can be differentiated into mature endothelial cells（ECs）. FACS can be used to efficiently identify EPCs for angiogenesis study.

Key words: Endothelial progenitor cells, Cell culture, Surface markers

秦宏伟,肖东杰,刘杰,胡安拉,马晓丽,汪运山,张红卫. 人外周血内皮前体细胞的分离、培养及流式细胞仪动态检测[J]. 山东大学学报(医学版), 2006, 44(12): 1197-1201.

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