E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

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E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

吕慧1，赵蔚明1，于修平1，郑燕1，王红1，周亚滨1，齐眉1，于晗1, 杨熙2

1. 山东大学医学院微生物学教研室，山东济南 250012；2. 加拿大曼尼托巴大学医学微生物系，加拿大曼尼托巴 R3E OW3

收稿日期:2006-06-07 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-12-24 发布日期:2006-12-24
通讯作者: 吕慧

L Hui1, ZHAO Weiming1, YU Xiuping1, ZHENG Yan1, WANG Hong1,ZHOU Yabin1, QI Mei1, YU Han1， YANG Xi2

1. Department of Microbiology, School of Medicine, Shangdong University, Jinan 250012, Shangdong, China;2. Department of Medical Microbiology and Immunology, Univerisity of Manitoba, Manitoba R3E OW3, Canada

Received:2006-06-07 Revised:1900-01-01 Online:2006-12-24 Published:2006-12-24
Contact: LV Hui

摘要/Abstract

摘要： 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白（MOMP）基因重组腺病毒，为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法: 根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物，用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段，克隆至pcDNAII载体，测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞，在CreloxP重组酶作用下进行重组，包装成重组腺病毒颗粒，用PCR和RTPCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1?kb的特异MOMP基因片段，酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316MOMP构建正确。穿梭载体pDC316MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞，出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒，PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因，RTPCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生，证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒，该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。

关键词: 小鼠, 近交BALB C , 基因, Major outer membrane protein, 沙眼, 重组腺病毒, 衣原体

Abstract: To construct a recombinant adenovirus AdMOMP carrying the major outer membrane protein (MOMP) gene of Chlamydia trachomatis serovar E, and provide the basis for further research on Chlamydia trachomatis adenovirus vaccine. Methods: The MOMP gene fragments of Chlamydia trachomatis serovar E were amplified from genome DNA by PCR method. They were cloned into pcDNAII vector and then were subcloneded into the pshuttle vector pDC316. The pshuttle vector pDC316MOMP and the genomic plasmids PBHGlox△E1, 3Cre were cotransfected into 293 cells for package and amplification of recombinant adenovirus AdMOMP, which was identified by PCR and RTPCR.

Key words: Chlamydia trachomatis, Recombinant adenovirus, Genes, major outer membrane protein, Mice, inbred BALB

吕慧,赵蔚明,于修平,郑燕,王红,周亚滨,齐眉,于晗,杨熙. E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究[J]. 山东大学学报(医学版), 2006, 44(12): 1189-1193.

L Hui,ZHAO Weiming,YU Xiuping,ZHENG Yan,WANG Hong,ZHOU Yabin,QI Mei,YU Han,YANG Xi. [J]. JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY (HEALTH SCIENCES), 2006, 44(12): 1189-1193.

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