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山东大学学报（医学版）

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嘌呤霉素敏感的氨肽酶对TauP301L诱导细胞凋亡的影响

王苗苗1，刁雪芹2，庄云龙3，许刚4，周楠1，贾阳磊1，李萌萌1，任桂杰1   

  1. 1.山东大学医学院生物化学与分子生物学系， 山东 济南 250012； 2.山东省血液中心济南血站， 山东 济南 250001；
    3.山东省血液中心， 山东 济南250014； 4.中国人民解放军第456医院， 山东 济南 250031
  • 收稿日期:2013-10-18 出版日期:2014-04-10 发布日期:2014-04-10
  • 通讯作者: 任桂杰 E-mail:rengj@sdu.edu.cn
  • 基金资助:
    教育部留学回国人员科研启动基金

Effects of puromycin-sensitive aminopeptidase on the apoptosis induced by TauP301L in the cultured cells

WANG Miaomiao1, DIAO Xueqin2, ZHUANG Yunlong3, XU Gang4, ZHOU Nan1, JIA Yanglei1, LI Mengmeng1, REN Guijie1   

  1. 1. Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Medicine, Shandong University,
    Jinan 250012, Shandong, China; 2. Jinan Blood Station, Blood Center of Shandong Province,
    Jinan 250001, Shandong, China; 3. Blood Center of Shandong Province, Jinan 250014, Shandong, China;
    4. People’s Liberation Army No.456 Hospital, Jinan 250031, Shandong, China
  • Received:2013-10-18 Online:2014-04-10 Published:2014-04-10

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595

摘要： 目的  探讨嘌呤霉素敏感的氨肽酶(PSA)对TauP301L诱导的细胞凋亡的影响。方法  将TauP301L表达载体转入SH-SY5Y和PC12细胞24、48和72h后，采用MTT法检测两种细胞增殖率的变化，Hoechst33342染色检测细胞核形态学的变化，确定TauP301L的最佳作用时间；在PC12细胞中转染TauP301L和PSA载体，在SH-SY5Y细胞中转染TauP301L和PSA-siRNA载体，Western blotting法检测Caspase-3的表达，酶标仪检测Caspase-3的活性变化，流式细胞法检测细胞凋亡率。结果  TauP301L诱导细胞凋亡具有时间依赖性。TauP301L转染细胞48h后，PC12细胞、SH-SY5Y细胞存活率明显下降(P<0.01)，细胞核出现凋亡的形态学变化；流式检测细胞凋亡率增加(P<0.01)。在PC12细胞中，与TauP301L组相比，PSA和TauP301L共同作用组Caspase-3的活性形式表达量及酶活性明显下降(P<0.01)，细胞凋亡率显著下降(P<0.01)；而在SH-SY5Y细胞中，与TauP301L组相比，TauP301L和PSA-siRNA共同作用组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05)，Caspase-3的活性形式表达量和活性均升高(P<0.01)。结论  TauP301L能够诱导细胞凋亡，而PSA能够下调TauP301L所诱导的这种凋亡，对神经细胞起到保护作用。

 

关键词: 嘌呤霉素敏感的氨肽酶, Caspase-3, 细胞凋亡, 神经细胞, TauP301L

Abstract: Objective  To explore the effect of puromycin-sensitive aminopeptidase (PSA) on  the apoptosis induced by TauP301L in SH-SY5Y cells and PC12 cells.  Methods  The proliferation and morphological changes of the cells  were detected after SH-SY5Y and PC12 cells were transfected with TauP301L for 24, 48 and 72h, respectively. The optimal time for TauP301L transfection was determined. To evaluate the effect of PSA on cell apoptosis, PC12 cells were transfected with PSA and TauP301L, and SH-SY5Y cells were transfected with PSA-siRNA and TauP301L. Cell apoptosis was determined by flow cytometry. The expression and activity of Caspase-3 were detected by Western blotting and Microplate reader, respectively. Results  TauP301L induced cells apoptosis in a time-dependent manner. After TauP301L transfection for 48h, the proliferations of SH-SY5Y and PC12 cells significantly decreased (P<0.01), while the apoptosis of the cells increased (P<0.01),as well as apoptosis-like cells could be found after Hoechst33342 staining of cell nuclei. Compared with TauP301L transfection, the expression and activity of Caspase-3 were downregulated (P<0.01), and the apoptosis decreased (P<0.01) after transfection with both PSA and TauP301L in PC12 cells. However, the expression and activity of Caspase-3 were upregulated (P<0.01) and the apoptosis increased (P<0.05) after transfection with both PSA-siRNA and TauP301L in SH-SY5Y cells. Conclusion  TauP301L can induce apoptosis in both SH-SY5Y cells and PC12 cells. PSA has a protective effect on nerve cells by inhibiting apoptosis induced by TauP301L.

Key words: Puromycin-sensitive aminopeptidase, TauP301L, Nerve cells, Caspase-3, Apoptosis

中图分类号: 

  • R574
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