您的位置:山东大学 -> 科技期刊社 -> 《山东大学学报(医学版)》

山东大学学报(医学版) ›› 2013, Vol. 51 ›› Issue (2): 12-16.

• 基础医学 • 上一篇    下一篇

HIF-1α慢病毒干扰载体构建及GL261小鼠胶质瘤稳定沉默细胞系的建立

徐洋洋1, 2,姜政1, 2,周伟3,江玉泉1, 2,李新钢1, 2   

  1. 1. 山东大学齐鲁医院神经外科; 2.  山东大学脑科学研究所; 3. 山东大学齐鲁医院放疗科, 济南 250012
  • 收稿日期:2012-08-16 出版日期:2013-02-10 发布日期:2013-02-10
  • 通讯作者: 李新钢(1959- ),男,教授,博士生导师,主要从事脑肿瘤基础与临床的研究。E-mail: lixg@sdu.edu.cn
  • 作者简介:徐洋洋(1987- ),男,硕士研究生,主要从事胶质瘤基础与临床研究。E-mail:xuyang0320@126.com
  • 基金资助:

    国家自然科学基金(30901536);山东省自然科学基金(ZR2010HQ026);山东省优秀中青年科学家基金(BS2011SW015);山东大学自主创新基金(2010TS103)

Construction of a lentiviral vector carrying shRNA against HIF-1α and generation of a GL261 cell line stably transfected with this vector

XU Yang-yang1,2, JIANG Zheng1,2, ZHOU Wei3,  JIANG Yu-quan1, 2,  LI Xin-gang1, 2   

  1. 1. Department of Neurosurgery, Qilu Hospital of Shandong University;
    2. Brain Science Research Institute, Shandong University;
    3. Department of Radiation Oncology, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, China
  • Received:2012-08-16 Online:2013-02-10 Published:2013-02-10

摘要:

目的 研究短发夹状RNA(shRNA)干扰慢病毒表达载体对小鼠胶质瘤GL261细胞系中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的沉默效应。方法 构建针对小鼠胶质瘤GL261细胞HIF-1α mRNA的不同干扰靶点的4个shRNA表达载体,筛选出HIF-1α基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA,构建pLenti6.3-shRNA3慢病毒载体感染靶细胞GL261,获得稳定沉默HIF-1α细胞株,利用实时定量PCR和Western blot方法检测稳定细胞株HIF-1α的沉默效应。结果 成功构建了具有HIF-1α沉默效应的慢病毒干扰载体,通过倍比稀释测定干涉病毒滴度为1.15×108TU/mL。实时定量PCR和Western blot实验均证实慢病毒转染后,GL261细胞株中HIF-1α表达水平明显降低。结论 针对HIF-1α基因不同位点的不同shRNA具有干扰效率的差异。特异性的shRNA可稳定地介导HIF-1α基因沉默。

关键词: 慢病毒;基因沉默;乏氧诱导因子-1α;RNA干扰;小鼠;GL261细胞

Abstract:

Objective   To construct a lentiviral vector carrying a short hairpin RNA (shRNA) targeting the HIF-1α gene and detect the silencing effect of the vector on mouse glioma cell line GL261. Methods   Four double-stranded shRNA targeting the HIF-1α gene were designed, synthesized and cloned. The resulting lentiviral vector containing HIF-1α shRNA was named as pLenti6.3-shRNA3. GL261 cells were transfected with pLenti6.3-shRNA3 lentivirus to obtain a cell line stably expressing HIF-1α shRNA. After the transfection, mRNA and protein expressions of HIF-1α in GL261 cells were detected by real-time PCR and Western blot, respectively. Results   A lentiviral vector carrying a shRNA targeting HIF-1α gene was successfully constructed. The GL261 cell line stably transfected with the vector was established. The recombinant lentivirus were harvested from 293T cells with titer of 1×108 TU/mL. Real-time PCR and Western blot analyses confirmed that the expressions of HIF-1α was down-regulated in GL261 cell line which stably transfected with the recombinant vector. Conclusion   shRNA targeting different sites of the HIF-1α gene exhibits different inhibitory effects. Specific shRNA could induce stable silencing of HIF-1α gene.

Key words:  Lentivirus;  HIF-1α;  RNA interference;  Mice;  GL261 cells

中图分类号: 

  • R651.1
[1] 曹伟,辛涛,刘威,张永超. 桥小脑角区肿瘤术后隐匿性脑脊液漏临床分析[J]. 山东大学学报(医学版), 2013, 51(12): 78-81.
[2] 刘文涛,张根堂,刘芳玲. 颅骨修补治疗线结排异反应23例[J]. 山东大学学报(医学版), 2013, 51(12): 86-87.
[3] 何伟,王志刚,丁璇,王成伟,王益华,姜彬,韩超. 低分级颅内动脉瘤手术与介入术后复发因素分析[J]. 山东大学学报(医学版), 2013, 51(7): 54-57.
[4] 梁楠,刘滨,范海涛,辛涛,郭华,刘威,赵光宇,栾立明,许尚臣,庞琦. 多形性胶质母细胞瘤患者高迁移率蛋白A1表达与复发时间的关系[J]. 山东大学学报(医学版), 2013, 51(4): 59-61.
[5] 纪森,王志刚,冀勇,王益华,韩超,姜彬,何伟. 脑动静脉畸形合并出血相关危险因素分析[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(6): 83-.
[6] 赵永辉1,高军2,李卓1,姜勇2. 酮对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(5): 55-.
[7] 范胜强,徐广明,姜萌,刘渤,赵华,杨伟. TSP-1、 TGF-β和PPAR-γ在脑胶质瘤中的表达及其与微血管密度的关系[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(2): 53-56.
[8] 吴大号,王常贞,许尚臣,庞琦. 髓母细胞瘤的综合诊治分析和改良手术[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(1): 101-.
[9] 赵端允1,迟令懿1,周旭东1,王洁2,胡科3,邵毅1. 脑实质内型表皮样囊肿临床特点及其治疗[J]. 山东大学学报(医学版), 2012, 50(1): 109-112.
[10] 郑德伟,王志刚,赵旭,李卫国,王益华,孟庆虎,曲春城,王成伟. 应用颅骨多处钻孔硬膜翻转并骨膜贴敷术治疗烟雾病[J]. 山东大学学报(医学版), 2011, 49(8): 140-.
[11] 刘滨,刘威,范海涛,侯现增,贾践博,许尚臣,庞琦. HGF及其受体C-Met 和VEGF与星形细胞肿瘤恶性程度及其血管生成之间的关系[J]. 山东大学学报(医学版), 2011, 49(2): 109-.
[12] 林涛1,李刚1 ,刘青林1,王敏卿1,王俊涛1,冯进波2. 冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制[J]. 山东大学学报(医学版), 2010, 48(8): 8-12.
[13] 刘殿玮1,姜勇1,韩向阳2. 蛛网膜下腔出血后下丘脑caspase-3、bax和bcl-2的表达及意义[J]. 山东大学学报(医学版), 2010, 48(2): 44-47.
[14] 王萍 王丽. 颅脑手术后颅内感染危险因素分析研究[J]. 山东大学学报(医学版), 2009, 47(12): 108-110.
[15] 展如才1, 李淑云2, 张合林1. 立体定向辅助神经内镜超早期治疗脑内血肿的临床研究[J]. 山东大学学报(医学版), 2010, 48(12): 162-164.
Viewed
Full text


Abstract

Cited

  Shared   
  Discussed   
No Suggested Reading articles found!